牛精子分离和性控胚胎体外生产研究

摘要

本研究对比了三头种公牛精子的分离效果；评估分离和冷冻对精子活力，体外受精效果以及胚胎发育的影响。另外，比较了BO液和Precoll法处理分离冻精对体外受精后胚胎发育的影响。并采用双重荧光分染方法，对分离精子和未分离精子牛体外受精囊胚质量进行了评价。试验结果表明，不同种公牛个体间除分离准确率外，精子的分离速率和死精率都存在显著差异(4.1×103 vs4.5×103 vs5.3×103，19.3% vs14.5% vs11.0%，P<0.05)。精液体外培养10分钟时，鲜精组与分离精液组在精子活力无显著性差异(84.5% vs83.4%，P>0.05)；但体外培养6小时，两组间出现了显著性差异(62.5% vs55.4%，P<0.05)。冷冻处理明显降低了分离和未分离精液的精子活力(分离83.4% vs55.3%；未分离：84.5% vs55.2%，P<0.05)；3头种公牛分离冻精组在4小时的精子活力明显低于未分离冻精组(9.1%vs25.9%，22.1% vs35.1%，21.5%vs36.5%，P<0.05)。因此，我们可以推断不同种公牛个体间精子的分离速率、死精率、以及对分离和冷冻处理的耐受性存在显著差异。分离处理对精子的损伤要小于冷冻处理，但是分离处理明显缩短了精子的受精存活时间，而且分离精子对冷冻处理的耐受性明显低于未分离精子。比较BO液和Percoll法处理法，结果表明，Percoll法处理后的精子体外受精后的卵裂率和囊胚率明显高于BO液处理法，但二者之间无显著差异(50.3% vs45.3%；23.0% vs19.1%，P>0.05)。
　　 本文利用不同种公牛的未分离精子(鲜精和冷冻)，和分离精子(鲜精和冷冻)进行体外受精试验，试验结果表明不同类型精子(鲜精、未分离冷冻、分离鲜精、分离冷冻)进行体外受精，受精后的卵裂率存在显著差异(73.6% vs63.970 vS64.2% vs45.7%，P<0.05)，但是囊胚发育率无显著差异(P>0.05)。1号种公牛的囊胚发育率显著低于2号和3号种公牛(24.3% vs29.7% vs29.6a/o，P<0.05)。分离精子和未分离精子牛体外受精囊胚的内胚团细胞数为29.5和35.8，分别占总细胞数的27.8%和32.8%无显著差异(P>0.05)。由此推断，精子分离并没有影响体外受精后的胚胎发育，但在种公牛个体间存在显著差异。因此，利用分离精子体外生产性控胚胎是可行的，而选择适宜的种公牛，则对于提高体外生产高质量的性控胚胎都有着重要的意义。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略语

声明

第一部分 研究论文

一、前言

二、材料与方法

1 材料与试验仪器

2 实验方法

三、结果与分析

1 不同种公牛精子分离效果比较

2 分离和冷冻处理对牛精子活力的影响

3 不同种公牛分离和未分离冻精解冻后活力的比较

4 卵母细胞的成熟率

5 BO液和Percoll法处理效果比较

6 分离和未分离精子体外受精后的原核形成与受精效果的比较

7 分离和未分离精子受精后卵母细胞的卵裂与胚胎发育的比较

8 不同种公牛的不同类型精子受精后的卵裂与胚胎发育情况

9 分离和未分离精子体外受精囊胚的细胞数比较

四、讨论

1 分离和冷冻处理过程对精子活力的影响

2 不同受精处理方法对卵裂率及胚胎发育的影响

3 分离和冷冻处理的精子对受精及胚胎发育的影响

4 不同种公牛对受精和胚胎发育的影响

5 分离精子体外受精囊胚质量评价

五、结论

参考文献

攻读硕士期间发表的学术论文

致谢

第二部分 文献综述

一、哺乳动物精子分离技术发展概况

二、流式细胞仪精子分离技术的发展概况

三、分离精子体外受精相关问题

四、牛囊胚细胞数测定

参考文献