Cdc2基因在绒山羊卵母细胞体外成熟过程中表达情况的研究

摘要

后期促进复合物或周期体(The anaphase-promoting complex orcyclosome，APC/C)是一个泛素连接酶复合体，它控制着细胞分裂的中期向后期的转换。在细胞中期，当染色体与纺锤丝正确连接时，Cdc20激活APC/C，进而启动一系列泛素化反应，染色体开始分离。这是一个保证细胞有丝分裂正常进行的重要机制。同样，其在减数分裂中也有着相同的作用。本研究中，我们分析了体外培养的卵母细胞中的Cdc20的表达情况，并对Cdc20进行了表达调控。我们构建了Myc-Cdc20载体，在将载体反转录成为cRNA之后通过显微注射的方法进行Cdc20的过量表达。此外，我们还通过western blot的方法检测了正常体外培养条件下的GV、GVBD、MⅠ和MⅡ期卵母细胞的Cdc20的表达情况。
　　首先，我们确定了在本实验室体外培养条件下的绒山羊卵母细胞成熟率和细胞到达GVBD、MⅠ和MⅡ期所需的时间。结果显示，在我们的培养条件下，卵母细胞成熟率为75％。8小时，卵母细胞发生GVBD，18小时到达MⅠ期，24小时后，有75％的卵母细胞排出第一极体，到达MⅡ期。
　　然后，我们将Myc-Cdc20 cRNA注射到到卵母细胞并进行体外培养，10小时后，我们检测到了MYC-CDC20融合蛋白的表达。但是，成熟时间和成熟率与正常条件下的体外培养并无差异性显著。我们通过western blot的方法检测了正常培养条件下的绒山羊卵母细胞GV期到MⅡ期CDC20蛋白的表达情况，结果表明从GV期到MⅡ期CDC20蛋白一直存在于卵母细胞中。

目录

声明

摘要

缩略词表

前言

第一章 载体的构建

1 材料和方法

1．1 材料

1．2 方法

2 结果

2．1 绒山羊卵巢总RNA的提取

2．2 绒山羊卵巢组织Cdc20基因的PCR扩增

2．3 绒山羊Cdc20基因的TA克隆

2．4 Cdc20-T及mMyc-Cdc20的酶切

2．5 对重组载体gMyc-Cdc20的PCR鉴定

2．6 GFP-Cdc20真核表达载体PCR鉴定

2．7 GFP-Cdc20融合基因在3T3细胞的表达

第二章 Cdc20在绒山羊卵母细胞表达情况的研究

1 材料和方法

1．1 材料

1．2 方法

2 结果

2．1 绒山羊卵母细胞的体外成熟培养

2．2 对重组载体gMyc-Cdc20的线性化

2．3 Cdc20 cRNA的合成

2．4 MYC-CDC20融合蛋白的表达检测

2．5 显微注射gMyc-Cdc20 cRNA后绒山羊卵母细胞体外培养成熟情况

2．6 正常绒山羊卵母细胞Cdc20在GV、GVBD、MⅠ、MⅡ期的表达情况

3 讨论

第三章 文献综述

1 Cdc20基因的分子作用机制

2 Cdc20与癌症

3 Cdc20在减数分裂过程中的作用

参考文献

致谢