利用分子标记进行草莓品种鉴定的研究

摘要

品种混乱是困扰草莓科研和生产的一大问题。分子标记技术的出现为这一问题的解决展现出光明前景。本课题旨在通过对几种分子标记的系统研究，为建立可用于鉴定草莓品种的稳定可靠的分子标记体系奠定基础。主要研究结果如下：1.改进CTAB法从草莓幼叶提取的总DNA可用于RAPD、SCAR和ISSR分析。2.建立了适宜的草莓RAPD分析体系，20μL反应体积中包括5μL稀释10倍后的DNA模板，2μL10×PCR反应缓冲液，1.6μLMgCl2，0.04μLdNTP，1.20μL引物和0.2μLTaqDNA聚合酶。反应程序为：94℃30sec；94℃30sec，40℃2min，72℃3min，45个循环；72℃延伸7min。在不同型号PCR仪上的扩增结果表明该RAPD体系重复性良好。3.利用8个RAPD引物对32份草莓材料进行鉴定，其中25份易于区分。来自不同地点的3份全明星材料总体带型基本一致，新明星与全明星之间只在一些弱带上有差异，不易区分。卡玛罗莎和童子一号，红脸颊和日本99号两对品种带型基本一致，只有一些弱带上有差异。结合形态学调查的结果，初步认为卡玛罗莎和童子一号，红脸颊和日本99号两对品种可能是同物异名的品种。3份丰香试材在叶片和果实形态上存在一定的差异，而引物RA12-5、OPO-04和WAA52都可以将其区分开，说明来自山东的两份材料可能是混杂的品种，属同名异物。4.初步建立了草莓ISSR标记分析体系。在供试的22个ISSR引物中筛选出4个用于草莓品种鉴定。5.将两个RAPD标记转化成片段长度分别为378bp和214bp的显性SCAR标记WS01和WS02。根据这两个位点的带型将供试草莓品种划分为4个类型。

目录

摘要

前言

一、分子标记

二、分子标记在草莓品种鉴定及其它遗传研究中的应用

三、课题研究的目的及意义

材料与方法

一、植物材料及试剂

二、试验方法

(一)草莓总DNA提取方法

(二)草莓总DNA检测

(三)分子标记

(四)特异DNA片段的克隆与测序

(五)SCAR引物设计

结果与分析

一、不同提取方法提取的草莓DNA质量和浓度分析

二、草莓RAPD体系的建立及品种鉴定

三、草莓ISSR体系建立及品种鉴定

四、SCAR标记的获得

讨论

一、DNA提取方法与DNA质量检测

二、RAPD标记的可重复性

三、影响RAPD标记转化成SCAR标记的因素

四、SCAR标记筛选的策略

五、两个SCAR标记遗传特性的探讨

结论

参考文献

附录

致谢

攻读硕士论文期间发表的文章