多色荧光原位杂交技术的建立及其在食管癌研究中的应用

摘要

本研究旨在以细胞系为模型建立一种多色荧光原位杂交技术，并将其应用于实体肿瘤的染色体畸变的鉴定。 方法：根据组合标记全染色体涂染探针(wholechromosomepaints，WCP)的原则，采用4种荧光染料(DEAC，FITC，Cy3和Cy5)，通过DOP-PCR法(degenerateoligonucleotideprimer-polymerasechainreaction)直接扩增，标记两组多色painting探针池，先后两次杂交到相同的中期染色体片，探针信号通过装备了相应滤镜组合及CCD相机的荧光显微镜捕获，应用MetamorphImagingSystem软件进行图像的摄取和处理，获得多色荧光原位杂交图。结合反相DAPI显带技术，对两例食管癌细胞系KYSE180和KYSE450(均来自男性患者)进行全染色体组畸变分析，根据ISCN(1995)标准鉴定其核型。结果：成功地建立了一种十二色荧光原位杂交技术，应用该技术研究发现KYSE180中畸变最多的染色体是1号、3号、5号、7号和14号。KYSE180的具体核型为：54(51-55)，-Y,+der(1)t(6；1)(pter→p10：：q10→qter)，+der(1)t(1；3)(q31→q10：：q21→q26)，dup(3)(q24→q26)，der(3)del(3)(：p21→q27：)，+der(3)del(3)(：p21→q27：)，+der(3)t(3；5)(qter→q10：：q14→q23)，+der(3)t(6；3)(q24→q16：：p12→qter)，+der(3)t(3；6)(pter→q10：：q11→qter)，der(4)t(4；8)(p15→qter：：q23)，der(5)t(5；14；3)(pter→q23：：q21→q31：：q28→q24)，+der(5)t(5；8)(pter→p10：：q24→q23)，+der(5)t(5；6)(pter→p10：：p12→p22)，-6，der(6)t(6；3)(pter→q14：：q13→q22)，del(7)(pter→q32：)，+der(7)del(7)(pter→q32：)，+der(7)t(10；7)(q21→q10：：q10→qter)，+der(8)t(8；16；16；2)(p12→q11：：p13→p12：：q12→q24：：p24→p22)，-9，-9，der(10)t(14；10)(qter→q10：：q10→qter)，+11，del(12)(：q10→qter)，+der(12)t(4；12；3；2)(p15：：p12→q12：：q21→q24：：p12→p24)，-13，-13，der(14)t(5；14；1)(p14：：q10→qter：：p11→p21)，der(14)t(3；14；5)(qter→q13：：pter→qter：：p14→p11)，+der(14)t(14；X；3)(qter→q10：：p10→p22：：q13→q26)，der(15)t(14；15)(q12→q21：：pter→qter)，der(15)t(18；15)(q22→q10：：q10→qter)，+der(16)del(16)(：p12→q22：)，der(17)t(17；3)(pter→qter：：p14→p24)，+der(17)t(3；11；17；8)(pter→p14：：p14→p11：：q10→q24：：p22→p12)，-18，+der(19)t(10；19)(p12→p11：：pter→qter)，-20，-22。KYSE450中畸变最1多的染色体是1号、7号、8号、9号和12号染色体。KYSE450的具体核型为：54(51-56)-Y,der(1)t(9；1)(pter→p10：：q10→qter)，+der(1)t(19；1)(p12→p10：：q10→qter)，+der(1)t(1；7；7)(pter→p10：：p11→p21：：q11→q35)，+der(2)t(16；2)(q21→q11：：q10→qter)，del(4)(pter→q24：)，der(5)t(5；15)(pter→qter：：q21)，der(7)t(7；3)(p21→p11：：q10→q11)，der(7)t(7；11)(p21→q11：：q23→q22)，+der(7)t(11；7)(qter→q10：：q10→qter)，+8，+der(8)del(8)(：p22→q12：)，+der(8)t(3；8)(q26→q28：：p12→qter)，+der(8)t(8；4)(p22→q21.1：：q32→qter)，+der(8)t(8；5)(p12→q21.1：：p14)，der(9)t(9；12)(pter→q31：：q21)，der(9)t(17；9)(q22→q24：：p21→qter)，+der(9)t(9；12)(p21→qter：：q21)，-10，-10，der(11)t(11；7；5)(p14→qter：：q22：：q32→q23)，der(12)t(12；9)(pter→q24.2：：q22→q31)，del(12)(pter→q22：)，+der(12)t(6；12)(p12：：p12→q23)，der(14)t(9,14)(q21→q31：：pter→qter)，+der(14)del(14)(pter→q21：)，+der(16)del(16)(：p12→qter)，+der(17)del(17)(：p12→q23：)，del(18)(pter→q11：)，del(19)(pter→q13.1：)，-20，-20，-22。两细胞系中染色体易位共同的断点发生于1q10，3q10，3q26，3q28，5p14，6p12，8p12，8p22，11p14，14q21，16p12和17q24等，均没有Y染色体成分。 结论：本研究中建立的十二色荧光原位杂交技术简便易行，适宜用于实体肿瘤的全染色体组的畸变分析。对食管癌细胞系KYSE180和KYSE450核型的鉴定有利于正确地将它们应用于相关科学研究中。

目录

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摘要

前言

文献综述

一、材料与方法

二、实验结果

讨论

结论

参考文献

致谢

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