肛门直肠畸形泄殖腔凋亡及肠管Cajal间质细胞的研究

摘要

本文拟通过乙烯硫脲致畸动物模型研究胚胎末期ARM整个肠管ICC的发育情况并进一步利用ARM患者直肠末端标本来研究直肠末端ICC的表达情况，为ARM术后便秘的诊断、治疗提供一些理论依据。 研究方法： 1、利用TUNEL染色技术检测正常胎鼠、泄殖腔畸形胎鼠胚胎13天-16天泄殖腔凋亡细胞的动态分布情况。 2、利用SABC染色方法研究正常胎鼠、泄殖腔畸形胎鼠胚胎13天-16天泄殖腔bcl-2，bax基因的表达情况。 3、利用SABC染色方法检测胚胎21天正常胎鼠、ARM胎鼠小肠、结肠和直肠ICC的发育情况。 4、利用RT-PCR方法研究28例ARM患者直肠末端c-kit基因和SCF基因的表达情况。 研究结果： 1、肛门直肠畸形泄殖腔凋亡细胞的动态分布情况： 正常胎鼠胚胎13天生殖结节已形成，泄殖腔的轮廓清晰，在泌尿生殖窦和直肠间可见尿直肠隔，尾沟已形成。尿直肠隔上皮层和间质区域可见凋亡细胞。随着胚胎发育，生殖结节逐渐向腹尾侧延伸，尿直肠隔逐渐向下延伸并向腹尾侧迁移，尾沟逐渐加深，泄殖腔膜向背尾侧旋转。尿直肠隔间质的凋亡细胞逐渐增多并向下延伸，腹侧间质比背侧间质凋亡细胞明显；直肠背侧间质可见大量凋亡细胞。胚胎14天，直肠末端和未来肛门开口处的泄殖腔膜开始出现凋亡细胞，此期为细胞凋亡发挥作用的关键时期。胚胎15天，尿直肠隔与泄殖腔膜融合，尿直肠隔间质内的凋亡细胞一直向下延伸到融合部位。胚胎16天，肛膜裂解，直肠与外界相通。 泄殖腔发育畸形胎鼠与正常胎鼠相比，生殖结节的发育、尿直肠隔的下降和泄殖腔构型的变化均不同程度的延迟。尿直肠隔间质、直肠背侧间质和泄殖腔膜的凋亡细胞均明显减少。胚胎15天，尿直肠隔未与泄殖腔膜融合，直肠末端与泄殖腔膜的距离仍较远。胚胎16天，肛膜未裂解，产生不同类型的ARM畸形。 2、肛门直肠畸形泄殖腔bcl-2，baX基因的表达情况： 正常胎鼠胚胎13天尿直肠隔上皮层bax抗体染色阳性细胞占细胞总数的80％以上；尿直肠隔间质染色阳性细胞很少，不超过总数的10％。随着胚胎发育，上皮层阳性细胞逐渐减少；而间质，胚胎14天阳性细胞明显增多，在未来肛门开口的泄殖腔膜上皮层可见阳性细胞。胚胎15、16天间质内的阳性细胞较少。与正常胎鼠相比，泄殖腔畸形胎鼠胚胎13.5天、14天上皮层和间质区域bax抗体阳性细胞明显减少。 正常胎鼠bcl-2抗体染色阳性细胞在尿直肠隔上皮层胚胎13天最明显，后逐渐减少。而在尿直肠隔间质区域阳性细胞不超过10％，各期无明显变化。与正常胎鼠相比，泄殖腔畸形胎鼠胚胎13.5天尿直肠隔上皮层和间质区域bcl-2抗体阳性细胞比例明显增加。 3、肛门直肠畸形肠管Cajal间质细胞的表达情况： 小肠、结肠和直肠c-kit抗体阳性细胞主要分布于肌间神经丛，肌间可见少量阳性细胞。 正常胎鼠，胚胎21天小肠、结肠和直肠80％以上的肌间神经丛周围可见大量c-kit抗体阳性细胞；ARM畸形胎鼠除小肠80％以上肌间神经丛周围有大量阳性细胞外，结肠和直肠阳性细胞明显减少，仅50％或50％以下的肌间神经丛周围有阳性细胞。 4、肛门直肠畸形直肠末端c-kit和SCF的表达情况： c-kit mRNA的表达在正常对照组、高位ARM组、中位．ARM组、低位ARM组、后天性肛瘘组分别为1.79±0.22、0.67±0.19、0.89±0.17、1.57±0.25、1.68±0.18。与正常对照组相比较，高位ARM组、中位ARM组有意义(P<0.05)；后天性肛瘘组、低位ARM组无意义(P>0.05)。 SCF mRNA的表达在正常对照组、高位ARM组、中位ARM组、低位ARM组、后天性肛瘘组分别为1.72±0.19、0.65+0.16、0.98+0.19、1.61±0.24、1.69±0.14。与正常对照组相比较，高位、中位ARM组有意义(P<0.05)；后天性肛瘘组、低位ARM组无意义(P>0.05)。 研究结论： 1、在肛门直肠的胚胎发育过程中，尿直肠隔的下降、融合过程、泄殖腔的构型变化和肛膜的裂解均与细胞凋亡密切相关。泄殖腔畸形胎鼠尿直肠隔间质、直肠背侧间质和泄殖腔膜的凋亡细胞明显减少，阻碍了泄殖腔的正常胚胎发育过程，可能是导致ARM产生的重要机制之一。 2、在泄殖腔发育过程中，尿直肠隔上皮细胞、间质细胞表达bcl-2、bax基因。并且这两种基因相互作用共同调节泄殖腔细胞的凋亡，保证泄殖腔的正常发育。而肛门直肠畸形胎鼠尿直肠隔上皮细胞、间质细胞bcl-2、bax基因表达异常，导致泄殖腔细胞凋亡的异常，是产生ARM畸形的原因之一。 3、ARM胎鼠结肠和直肠胚胎后期ICC的发育异常可能影响其生后完善的ICC网络的建立，导致胃肠动力功能紊乱，可能是ARM术后便秘的原因之一。 4、高、中位ARM患者直肠末端c-kit和SCF表达的减少是先天性的，并影响ICC的发育和功能，可能是术后便秘产生的分子生物学证据之一。

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论文一肛门直肠畸形胚胎发育过程中凋亡的研究

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论文二肛门直肠畸形泄殖腔Bcl-2和Bax基因表达的研究

前言

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结论

论文三肛门直肠畸形肠管Cajal间质细胞的研究

前言

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结论

论文四肛门直肠畸形直肠末端c-kit和SCF表达的研究

前言

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结论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述胃肠道运动功能的影响因素与儿童胃肠道疾病

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