5氮杂胞苷对化疗药长春新碱及环磷酰氨诱导NB细胞凋亡的调节作用

摘要

目的：神经母细胞瘤(NB)是儿童常见的颅外实体肿瘤之一。年龄超过一岁，伴有N—myc基因扩增的NB患儿预后不佳。目前的治疗方法包括外科手术，化疗，干细胞移植等疗效均不十分理想。其中NB细胞对化疗药耐药便是其中一个比较突出的问题，因此，如何能够逆转NB细胞对化疗药物的耐药便成为一个热点问题。 天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶(caspase)是一组与细胞因子成熟和细胞凋亡有关的酶，共14种。caspase-8是其中一员，具有强大的凋亡激发和传导功能。是NB细胞凋亡通路的重要一环。根据国外的相关文献报道，预后较好，对化疗药敏感的NB细胞都有caspase-8蛋白的表达，相反预后差，对化疗药耐药的NB细胞则无caspase-8表达。另有文献报道，NB细胞中caspase-8沉默的主要原因是其基因的超甲基化。 本实验应用细胞免疫组化染色及MTT细胞毒实验的方法来检测去甲基药5AZA是否可以通过逆转caspase-8基因的超甲基化来使NB细胞重新表达caspase-8蛋白，以及表达了caspase-8的NB细胞是否能够恢复对传统化疗药长春新碱和环磷酰氨的敏感性。 方法: (1)细胞免疫组化染色方法检测5AZA是否可以使NB细胞重新表达caspase-8蛋白。 (2)实验以5AZA培养的细胞为实验组，未用药物处理的为对照组，用zlETD—FMK处理的细胞为抑制剂组，通过MTT细胞毒实验测量细胞经过化疗药作用后的存活率来检测经5AZA作用而重新表达caspase-8蛋白的NB细胞是否恢复对传统化疗药物的敏感性。 结果: 通过免疫组化染色的实验得到的结果是去甲基药5AZA可以通过逆转caspase-8基因的超甲基化来使NB细胞重新表达caspase-8蛋白，而MTT细胞毒实验结果表明5AZA可以通过使SY5Y细胞重新表达Caspase-8蛋白而重新恢复对化疗药长春新碱及环磷酰胺的敏感性。 结论: 去甲基药5AZA可以使NB细胞的caspase-8恢复表达，而恢复表达caspase-8的NB细胞可以恢复对传统化疗药的敏感性。

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综述TRAIL途径中Caspase-8沉默与神经母细胞瘤耐药的关系

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