正畸力作用下兔牙周组织中核糖体蛋白S6激酶的表达

摘要

目的: 建立动物模型，采用免疫组化、RT-PCR、Western免疫印迹分析方法，检测雷帕霉素靶蛋白(mTOR)下游底物核糖体蛋白S6激酶(p70 S6K)在正畸牙移动牙周组织改建过程中的表达及变化，研究正畸力作用下兔牙周组织中核糖体蛋白S6激酶(p70 S6K)在牙周组织改建过程中的作用。 方法: 1、建立动物模型选用36只日本大耳白兔(体重2.0±0.2kg)，建立正畸牙移动的动物模型，按照3天、5天、7天、14天随机分组，每组9只。上颌右侧戴矫治器为实验组，分别在切牙与磨牙的近颈端缠绕双股结扎丝，然后在切牙与磨牙间放置镍钛螺簧，力值80g，使磨牙近中移动。上颌左侧未戴矫治器为对照组。实验动物分别于3、5、7、14天处死。 2、免疫组化SP法将实验组及对照组牙周组织石蜡标本进行核糖体蛋白S6激酶(p70 S6 Kinase，p70 S6K)免疫组化染色，观察其表达并分析其意义。 3、RT-PCR按逆转录试剂盒使用说明操作，选用oligo dT作引物合成第一链cDNA，RT-PCR检测正畸力作用下p70 S6K在牙周组织中的表达变化，琼脂糖凝胶电泳溴化乙锭染色分析检测结果。 4、Western免疫印迹分析吸取上清，弃沉淀，考马斯亮蓝法测定样品中蛋白浓度。上清用10％ SDS-PAGE分离然后转移到PVDF膜上，经2h 50V的转印后TTBS洗膜5 min×3次。用含5％BSA的TTBS封闭，4℃过夜，再与抗p70 S6K抗体室温孵育2h，与相应的HRP标记的羊抗兔二抗(1:5000)室温孵育1h，ECL系统显影。 5、统计学分析应用SPSS 11.5统计软件对戴矫治器组与未戴矫治器组进行配对t检验。P<0.05为显著性差异。 结果: 1、组织形态学观察组织形态学观察:实验组的牙周组织较对照组有明显改建，牙槽骨由致密变得疏松，细胞的排列由有序变紊乱，牙槽骨的骨壁由平整变得凸凹不平，出现了破骨细胞及骨陷窝。 2、p70 S6K在牙周组织中的定位免疫组化结果：正畸力作用下p70 S6K在牙周组织细胞中染色增强，且主要定位于成纤维细胞、成骨细胞胞浆中，血管内皮细胞及骨细胞胞浆中亦可见。 3、RT-PCR与对照组比较，加力3天后牙周组织中p70 S6K mRNA表达增加，7天明显增加，随后下降，3天、7天、14天各时段与对照组比较均有统计学差异，其中7天差异更显著。 4、Western免疫印迹分析与RT-PCR结果相一致。正畸力作用下p70 S6K在兔牙周组织中的蛋白表达增加，7天尤为显著，随后下降。3天、7天、14天各时段与对照组比较均有统计学差异，其中7天差异更显著。 结论: 1、p70 S6K在正畸力作用下兔牙周组织细胞中染色增强，且主要定位于成骨细胞，成纤维细胞胞浆中，血管内皮细胞和骨细胞胞浆中亦可见。 2、正畸力作用下兔牙周组织中p70 S6K的表达增加。 3、随着牙周组织的改建，p70 S6K的表达量7天时达高峰。 4、p70 S6K参与正畸牙移动过程中牙周组织的改建。

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综述：mTOP活性及其上下游区效应因子

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