β-AR基因Trp64ArgSNP与存在OAB的逼尿肌细胞内cAMP浓度的关系研究

摘要

目的： 目前研究膀胱过度活动证(OAB)的发生机制主要集中在逼尿肌受体的异常，已证实在介导逼尿肌松弛中起主要作用的是β3肾上腺素能受体(β3—AR)。通过进行逼尿肌细胞的培养，对比分析OAB病例和正常对照组之间β3—AR的Trp64ArgSNP的基因突变率，以及存在此突变的β3—AR OAB病例与其他对照组在不同浓度BRL37344激活下逼尿肌细胞内cAMP表达水平的比较，明确此β3—AR基因突变是OAB发生及治疗耐药的一个原因。 方法： 一、逼尿肌细胞的培养 选取临床尿动力学检测证实为OAB病例22名和20名正常作对照，取膀胱组织行逼尿肌细胞培养。 (1)、原代逼尿肌细胞分离 (2)、原代逼尿肌细胞的培养 (3)、逼尿肌细胞的传代 (4)、逼尿肌细胞的鉴定 二、对比分析OAB组与对照组β3—AR的Trp64ArgSNP的突变率 (1)、DNA提取 (2)、DNA测序 三、对比分析β3—AR的Trp64ArgSNP与其引起的cAMP表达水平的关系 将经过鉴定的逼尿肌细胞按OAB组存在β3—AR的Trp64ArgSNP、OAB组野生型β3—AR和对照组野生型β3—AR分别加入100μl BRL—37344(4个浓度组——10-7、10-8、10-9、10-10mol/L)，用超声细胞破碎仪破碎细胞(30s×5次)，12000r/mIn4℃离心10 min，然后分别吸取上清液留用。cAMP的测定按cAMP放射免疫试剂盒说明书进行。 结果： 一、细胞培养 (1)、原代培养的逼尿肌细胞生长形态 (2)、逼尿肌细胞的免疫组化鉴定 二、OAB组与对照组β3—AR的Trp64ArgSNP突变率 OAB组22名病例发生突变12名，突变率55％；对照组20名病例发生突变4名，突变率20％。两组突变率有显著性差异(X2=5.30，P<0.05)。 三、β3—AR的Trp64ArgSNP与其引起的cAMP表达水平的关系 OAB组Trp64ArgSNP的β3—AR逼尿肌细胞，野生型β3—AR逼尿肌细胞，以及对照组野生型β3—AR逼尿肌细胞的三种细胞产生的cAMP水平在BRL—37344(10-10～10-7mol/L)作用下呈剂量依赖关系，经q检验其差异有统计学意义(P<0.01)，BRL—37344最大作用见于10-7mol/L。 对比分析在BRL—37344各个浓度(10-7、10-8、10-9、10-10mol/L)下，OAB组Trp64ArgSNP的β3—AR逼尿肌细胞，野生型β3—AR逼尿肌细胞，以及对照组野生型β3—AR逼尿肌细胞的三种细胞产生的cAMP水平，经q检验其差异有统计学意义(P<0.01)，结果表明对照组野生型β3—AR逼尿肌细胞产生的cAMP水平最高，OAB组Trp64ArgSNP的β3—AR膀胱逼尿肌细胞产生的cAMP水平最低。 结论 1、OAB组病例β3—AR的Trp64ArgSNP突变率明显增高，不同BRL—37344浓度下，OAB病例组Trp64ArgSNP的β3—AR和野生型β3—AR逼尿肌细胞表达的cAMP水平均低于对照组野生型β3—AR逼尿肌细胞，OAB病例β3—AR松弛逼尿肌功能障碍与该受体亚型Trp64ArgSNP有关。 2、OAB病例组Trp64ArgSNP的β3—AR逼尿肌细胞的BRL—37344浓度依赖性cAMP表达水平升高的趋势明显低于该组中野生型的β3—AR逼尿肌细胞，β3—AR的Trp64ArgSNP突变是部分OAB病人对肾上腺素能受体激动剂治疗效果不佳的原因。

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结论

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综述：β3肾上腺素能受体基因Trp64ArgSNP与逼尿肌不稳定的研究进展

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