高血压基因组扫描及去甲肾上腺素转运蛋白、缓激肽β2受体基因多态性与高血压关系的研究

摘要

背景和目的：
　　 高血压是严重危害人类健康的常见复杂疾病之一，已成为世界范围的重要的公共卫生问题。在我国其发病率高、致残率高、致死率也高，是脑卒中、冠心病的危险因素。目前认为，高血压是多种遗传因素和环境因素以及基因-基因间，基因-环境间相互作用的结果，具有遗传异质性，延迟显性及种族差异等特征。研究表明血压变异的30％-50%受到遗传因素的影响[1]，而这些遗传因素包括多个基因的作用，每个基因的作用可能是微效的。如果能对高血压相关基因多态性与高血压的相关性进行研究，确定与高血压相关的位点，就可以通过基因分子生物学等方法对高血压及其相关疾病采取早预防早诊断和早治疗等措施，对患者、患者家庭及社会都具有极重要的意义。
　　 一般认为微效基因作用模式在原发性高血压(EH)的遗传机制中起主要作用，即来自多个位点的大多数风险等位基因在群体中的发生频率都很低，它们之间通过数量性状的剂量-效应关系进行相互作用，达到疾病发生的临界阈值，共同决定EH的遗传易感性。目前对高血压遗传研究尚无既定的方法模式，其中主要的几种策略如候选基因克隆、定位候选基因克隆与全基因组扫描、中间表型、动物模型及比较基因组学等。
　　 EH相关的基因多存在于肾素-血管紧张素.醛固酮系统(RAAS)、交感神经系统、内皮系统和某些信号通路等系统中。交感神经反应性增强与高血压的形成密切相关。交感神经系统基因多态性与高血压的关系成为研究的热点之一。激肽释放酶-激肽系统(KKS)是机体重要的调节系统，广泛地存在于许多组织和器官中，参与多种生理和病理生理过程，如心血管、肾脏和神经系统的功能调节，平滑肌收缩、葡萄糖代谢、细胞增殖、炎症与疼痛及休克过程等。近年来特别是在心血管方面的研究进展很快，许多临床研究和基础实验已证实KKS具有强大的心血管保护作用，如调节血压、抑制心肌肥厚的形成、减少缺血再灌注损伤和参与缺血预适应形成。KKS对于增加肾血流及Na+排出具有十分重要的意义。本实验通过全基因组扫描筛查原发性高血压的相关基因位点，并对交感神经系统的去甲肾上腺素转运蛋白基因及激肽释放酶.激肽系统的缓激肽β2受体基因多态位点与高血压的关系进行分析，为高血压的发病机制研究提供线索。
　　 研究方法：
　　 1、高血压家系及对照组的采集、流行病学问卷调查
　　 在辽宁省阜新地区筛选两代或三代以上有高血压的家系，在家系中选择高血压患者(SBP≥140mmHg和/或DBP≥90mmHg，或两周内服降压药者)作为家系高血压组(n=850)；在阜新地区收集年龄≥55岁，血压<140/90mmHg的非家系非高血压健康人群作为对照组(n=380)，对两组人群进行流行病学问卷调查。
　　 2、体格检查
　　 对收集的研究对象进行血压、身高、体重、腹围的测量。
　　 3、采外周血行实验室检查及DNA提取
　　 对研究对象行外周血的采集，黄色生化管进行血液生化检查，紫色抗凝管行基因组DNA的提取。
　　 4、DNA浓度测定及DNA混合池构建
　　 用nano-drop分光光度仪对已提取的DNA进行浓度测定，每份样本分别抽取100ng，在高血压组(可用样本740份)和非家系非高血压组(可用样本361份)分别构建DNA混合池14个。
　　 5、全基因组扫描
　　 采用Affymetrix SNP6.0芯片(上海晶泰生物技术有限公司)对DNA混合样本行全基因组扫描，定位SNP位点。
　　 6、目的基因多态性分析
　　 用聚合酶链式反应(PCR)，Sanger测序等方法对Affymetrix SNP6.0芯片不包含的四个位点，即交感神经系统的去甲肾上腺素转运蛋白基因的rs1805067和rs2397771两个SNP位点多态性及激肽释放酶.激肽系统的缓激肽β2受体基因的rs1799722和rs1046248两个SNP位点多态性进行测定，研究其与EH的关系。
　　 实验结果：
　　 1、高血压组收缩压、舒张压、体重指数、血肌酐和饮酒百分率高于对照组，年龄低于对照组，差异有显著性；高血压组总蛋白、白蛋白、TC、HDL-C、LDL-C、TG、FPG和吸烟百分率均与对照组无显著性差异。
　　 2、高血压组和对照组间有两个位点rs4540261和rs9625367有显著性差异P<10-5。
　　 3、去甲肾上腺转运蛋白基因rs1805067和rs2397771两个位点经PCR扩增后电泳产物分别为640bp和437bp的目的基因片段。rs1805067(A/G)多态性在高血压组G占100%，A占0%，在对照组G占100%，A占0%，两组间没有差异(P>0.05)。rs2397771(C/G)多态性在高血压组G占46.30%，C占53.70%，在对照组G占61.19%，C占39.81%，两组间有显著性差异(P<0.05)。
　　 4、缓激肽β2受体基因rs1799722和rs1046248两个位点经PCR扩增后电泳产物分别为395bp和369bp的目的基因片段。rs1799722(C/T)多态性在高血压组T占77.78%，C占22.23%，在对照组T占64.81%，C占35.12%，两组间有显著性差异(P<0.05)。rs1046248(C/T)多态性在高血压组C占100%，T占0%，在对照组C占100%，T占O%，两组间没有差异(P>0.05)。
　　 结论：
　　 1、辽宁省阜新地区EH发病可能与体重指数、饮酒有关，高血压患者的肾脏功能损伤较早。
　　 2、辽宁省阜新地区EH可能与以下SNP位点有关：rs：4540261；rs：9625367。
　　 3、辽宁省阜新地区高血压发病可能与去甲肾上腺转运蛋白基因rs1805067(A/G)多态性无关，与rs2397771(C/G)多态性有关。
　　 4、辽宁省阜新地区高血压发病可能与缓激肽β2受体基因rs1799722(C/T)多态性有关，与rs1046248(C/T)多态性无关。