槐杞黄对哮喘大鼠转录因子GATA-3表达及其相关细胞因子的影响

摘要

目的:支气管哮喘是以气道高反应性和嗜酸性粒细胞性气道炎症为特征的免疫紊乱性疾病。众多研究表明，Th1/Th2功能失衡、Th2细胞优势分化是导致哮喘发病的重要机制之一。Th细胞所处的细胞因子环境是Th0细胞向Th1、Th2方向分化的最强烈的调控因素，而细胞因子的作用需要通过细胞内信号途径和核转录因子才能实现。现有资料提示，GATA-3是Th0细胞的分化过程中重要的转录因子，使Th0细胞向Th2分化。IL-5是由Th2细胞分泌的细胞因子，它促进嗜酸性粒细胞的产生和在气道的聚集。Th1细胞分泌INF-γ等细胞因子，抑制哮喘反应。目前支气管哮喘的治疗主要依靠抗炎和解痉，而针对免疫发病机制的治疗较为薄弱。槐杞黄为临床辅助治疗儿童支气管哮喘的免疫调节药物，本实验通过给予哮喘动物模型不同的干预措施，测定Th1、Th2细胞因子水平和GATA-3表达，比较不同干预效果。以期为儿童哮喘的临床治疗提供理论及实验依据。
　　 方法:
　　 1、实验动物雌性wistar大鼠40只，SPF级，体质量140±10克，由中国医科大学中心实验室动物部提供。饲养条件一致。
　　 2、大鼠哮喘模型的制作将研究对象随机分成正常对照组(N)、哮喘组(A)、地塞米松组(D)、地塞米松组+槐杞黄组(H)，每组10只。按照wistar大鼠哮喘模型制作哮喘模型[5]。按不同的影响因素分别进行研究。饲养期间给予正常饮食。
　　 3、标本采集于第21天末次激发后24h内取材。麻醉、解剖后，进行支气管左肺肺泡灌洗。右肺中叶置于4％多聚甲醛用于HE染色和免疫组化染色。剩余气管及肺组织-80℃冰箱保存用于抽提总RNA。
　　 4、支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞(Eos)计数。
　　 5、ELISA检测各组大鼠血清OVA-IgE、BALF中IL-5、INF-γ水平。
　　 6、支气管及肺组织病理学检测；免疫组化图像分析检测GATA-3表达。
　　 7、real-time PCR检测GATA-3mRNA在不同组大鼠气管肺组织的表达。
　　 结果：
　　 1、一般情况观察经OVA激发后，模型组大鼠出现烦躁不安，呼吸增快，咳嗽，腹肌收缩，弓背向上，抓挠口鼻，反应迟钝，二便失禁等症状，严重者可见呼吸急促，呼吸节律不整，口唇紫绀；长期激发可见体质量减轻，毛色失去光泽，精神状态差；给药组，上述症状可获得不同程度的缓解。
　　 2、对血清中OVA-IgE、BALF中IL-5含量和细胞总数(×106/mL)及Eos％的影响：上述各指标A组较N组显著增高；D组和H组较A组有所改善；H组较D组进一步下降；与N组比较，H组OVA-IgE、IL-5含量和Eos％基本降至正常水平，差异无统计学意义。对BALF中INFγ的水平的影响：A组低于N组；D组和H组各指标较A组回升；H组较D组进一步回升，与N组比较，差异无显著差异。
　　 3、病理A组大鼠细支气管管壁和肺组织中可见大量淋巴细胞及嗜酸性粒细胞和中性粒细胞浸润；D组和H较A组支气管和肺组织炎性细胞浸润情况减轻。
　　 4、免疫组化图像分析检测各组哮喘大鼠肺组织内GATA-3的表达A组的表达强度异常增强，表达范围广泛；D和H组均较A组显著减少；H组D组表达进一步减少；H组与A组相近，差异无统计学意义。
　　 5、real-time PCR检测各组大鼠肺组织内GATA-3mRNA表达与正常组相比，哮喘组表达增强；D组和H组均较A组表达减少；H组均较D组表达进一步减少；H组的表达与N组相近，差异无统计学意义。
　　 结论：槐杞黄辅助治疗可以抑制哮喘大鼠OVA-IgE和IL-5的合成，其机制可能与其降低GATA-3在肺组织的表达，继发抑制Th2型免疫反应有关，从而发挥其抗EOS性气道炎症。

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论文 槐杞黄对哮喘大鼠转录因子GATA-3表达及相关细胞因子的影响

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综述 转录因子GATA-3与哮喘

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