Annexin V/PI双染法和MTT法评价无镍奥氏体不锈钢对人牙龈成纤维细胞的影响

摘要

目的：
　　 金属材料具有韧性和高强度的特点,在口腔材料中得到广泛应用。在临床上由于磨损、腐蚀等原因导致金属离子析出而产生细胞毒性。每一种口腔材料在应用于临床前都要进行大量实验以确保其在临床应用中具有良好的理化性能及生物相容性。BIOSSN4无镍不锈钢是中科院金属研究所研发的一种奥氏体医用不锈钢材料,可应用于磁性附着体的激光焊接不锈钢封套,使稀土类永磁体防腐性能明显提高。这种不锈钢完全抛弃了镍元素,采用氮元素强化奥氏体基体,这种材料优良的机械性能已经通过实验得到验证。本实验通过MTT法和Annexin-VFITC/PI双染法检测BIOSSN4含氮无镍奥氏体不锈钢和其他4种金属对人牙龈成纤维细胞凋亡的影响,进而评价BIOSSN4无镍奥氏体不锈钢的生物相容性。
　　 材料与方法：
　　 1、细胞培养
　　 人牙龈成纤维细胞用含10%胎牛血清的DMEM高糖细胞培养基在37℃、5%的CO2培养箱中培养并传代。
　　 2、MTT实验
　　 以5种金属浸提液及阴性对照培养24h、48h、72h后,用自动酶标仪检测吸光度值,计算细胞增殖率P。
　　 3、Anrlexin-fitc/PI双染色法检测细胞在凋亡不同阶段的凋亡数量。
　　 将5种金属合金及阴性对照组的浸提液与人牙龈成纤维细胞联合培养48h后,分别进行FITC、PI双染色,然后通过流式细胞仪检测不同实验组细胞的早期凋亡率。
　　 结果：
　　 1、在MTT比色实验中,阳性对照组与其他各组之间的吸光度值的差异均有统计学意义(P＜0.05),五个材料组的细胞相对增殖率由大到小的顺序为:金合金＞无镍奥氏体不锈钢＞钴铬合金＞317L奥氏体不锈钢＞纯铜。
　　 2、实验组细胞经AnnexinV-fitc和PI双染色后,流式细胞仪检测结果表明各实验组引起的细胞早起凋亡率是不同的。其中金合金组最低并且最接近阴性对照组,无镍奥氏体不锈钢组与金合金组较接近,其他金属组均高于金合金组,其中纯铜组引起的细胞早期凋亡率最高,且远高于其他各组,其细胞早期凋亡率由低到高的顺序为:金合金＜无镍奥氏体不锈钢＜钴铬合金＜317L奥氏体不锈钢＜纯铜。
　　 结论：
　　 1、各实验组生物相容性由好到差的顺序依次为:金合金、无镍奥氏体不锈钢、钴铬合金、317L奥氏体不锈钢、纯铜。
　　 2、无镍奥氏体不锈钢可考虑应用于临床。