β-榄香烯通过PI3K/Akt信号传导通路抑制血管内皮细胞增殖的研究

摘要

背景:
　　 β-榄香烯(β-elemene)是从中药温郁金根茎中提取的抗癌有效成分，是一种新型抗癌药，其对肝肾功能无损害、无骨髓抑制、抗癌谱广。目前已有研究证实β-榄香烯对喉癌、食管癌、胃癌、结肠癌、舌癌、宫颈癌、肺癌、卵巢癌、甲状腺癌、膀胱癌、神经胶质瘤、肝癌等有治疗作用。β-榄香烯抗肿瘤作用机理包括以下方面:β-榄香烯可直接杀伤肿瘤细胞。β-榄香烯通过影响肿瘤细胞的生长周期，抑制肿瘤细胞的DNA、RNA合成而抑制肿瘤细胞的生长。榄香烯可通过抑制端粒酶活性诱导肿瘤细胞凋亡。榄香烯可使癌基因表达降低，抑癌基因表达增强。β-榄香烯可逆转肿瘤细胞耐药，抗肿瘤细胞浸润及迁移，并对放化疗有一定增敏作用。
　　 还有研究表明，β-榄香烯可抑制肿瘤血管生成。榄香烯可通过与eLF家族成员作用引起相关蛋白血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维生长因子(bFGF)表达下降，抑制肿瘤血管生成，同时能够降低VEGF-C、VEGFR-3的表达水平，从而起到抑制肿瘤血管、淋巴管转移的作用。本实验室的前期研究表明，榄香烯能抑制血管内皮细胞的增殖活性，诱导人脐静脉内皮细胞凋亡。
　　 PI3K/Akt通路是细胞的重要信号转导通路，其独立于其它生长因子信号传导系统，通过影响凋亡相关蛋白和细胞周期调节蛋白等的活化，参与调控细胞的代谢、生长和凋亡。本文通过研究β-榄香烯作用下血管内皮细胞PI3K/Akt蛋白的改变，进一步探讨β-榄香烯对血管内皮细胞作用的机制及路径。
　　 材料与方法:
　　 一、细胞培养
　　 人脐静脉内皮细胞株(HUVECs)用含10％灭活胎牛血清的1640培养基培养，37℃、5％CO2饱和湿度的培养箱孵育，每日换液一次，2日传代一次，用0.25％的胰蛋白酶消化细胞。
　　 二、肿瘤上清液的制备
　　 培养胃癌823细胞，当其融合达80％时换以无血清1640培养基，继续培养24小时，离心收集上清液，将其与1640培养液以1:4的比例混匀备用。
　　 三、MTT法检测β-榄香烯作用对HUVECs增殖的影响
　　 不同浓度β-榄香烯作用组:-HUVECs中分别加入含2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml、16μg/m1β-榄香烯的作用液孵育24小时，不加β-榄香烯组为对照组。
　　 不同时间β-榄香烯作用组:8 u g/mlβ-榄香烯作用于HUVECs0，24，48，72小时。
　　 将HUVECs细胞接种于96孔板中，分别加入不同浓度β-榄香烯，或β-榄香烯作用不同时间后，加入MTT溶液4小时，孔内形成紫色结晶，再加入DMSO溶液终止反应，振荡混匀，置于酶标仪上检测光吸收值(OD)，测定波长为490nm。
　　 四、Western b lot检测β-榄香烯作用对HUVECs PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达的影响
　　 采用Western Blot检测不同浓度β-榄香烯（1μg/ml、2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml、16μg/ml、32μg/ml）作用6小时后，HUVECs中PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达的变化。
　　 五、统计学处理
　　 各组实验重复三次。以Bioimagining System灰度测量系统测量westen blot条带灰度值，应用SPSS17.0统计软件进行统计学分析和处理，统计方法采用单因素方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。
　　 实验结果:
　　 一、β-榄香烯对HUVECs增殖率的影响
　　 MTT法检测，除2μg/mlβ-榄香烯作用24小时，对HUVECs的增殖具有促进作用外，其余浓度β-榄香烯对HUVECs的增殖均有明显的抑制作用，并呈剂量和时间依赖性。
　　 二、β-榄香烯对肿瘤细胞上清液诱导的HUVECs PI3K、Akt及p-Akt蛋白表达的影响
　　 肿瘤上清液刺激可使HUVECs Akt及p-Akt蛋白表达增加。β-榄香烯作用组HUVECs中PI3K蛋白表达增加，对Akt蛋白表达无明显影响;HUVECs中p-Akt蛋白表达随着β-榄香烯浓度升高而逐渐减少。
　　 结论:
　　 β-榄香烯可抑制HUVECs的增殖，其作用可能是通过抑制PI3K/Akt通路中磷酸化Akt的蛋白表达实现的。

目录

声明

摘要

英文缩略语

论文

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述

致谢

个人简介