辽宁地区近五年碳青霉烯类药物耐药的鲍曼不动杆菌耐药分子特征研究

摘要

目的:研究碳青霉烯类抗菌药物耐药的鲍曼不动杆菌(CRAB)编码碳青霉烯酶的主要耐药基因类型，包括编码丝氨酸蛋白酶（A类酶）、苯唑西林水解酶（D类酶）以及金属酶（B类酶）的基因类型。明确本地区CRAB的临床分布特征及耐药的分子机制，为治疗和控制CRAB感染提供理论参考依据。
　　研究方法:1、研究对象:中国医科大学附属第一医院检验科2011年1月至2015年12月无菌体液标本分离培养获得的57株CRAB菌株。
　　2、主要试剂及仪器:VITEK-2全自动微生物分析系统及鉴定卡;法国梅里埃生物公司的抗菌药物药敏卡;日本TakaRa公司的DNA提取试剂盒;美国ABI公司的9700型PCR扩增仪;美国Alpha Innotech有限公司的紫外凝胶成像仪;BIO-RAD电泳仪。PCR所有引物均由上海生工生物技术有限公司合成。
　　3、菌株鉴定和药敏试验:采用VITEK-2全自动微生物分析系统进行菌株鉴定和药敏分析，并通过Whonet5.6分析软件对结果进行分析处理。药敏结果依据美国临床实验室标准化研究所(CLSI) M100-22标准进行判定。
　　4、核酸DNA提取:将菌株接种到血平板37℃培养箱中过夜培养，应用TakaRaminiBEST Bacterial Genomic Extraction DNA试剂盒提取57株CRAB菌株DNA各200μL。
　　5、耐药基因检测:采用聚合酶链反应(PCR)检测CRAB中编码碳青霉烯酶的耐药基因包括A类酶:blaPER-1;B类酶:blaVIM和blaIMP;D类酶:blaOXA-51，blaOXA-23，blaOXA-24，blaOXA-58。扩增产物经1.5％的琼脂糖凝胶电泳分析，电泳结束后在紫外凝胶成像仪下观察目的基因条带，并拍照成像。
　　6、基因测序: PCR产物送上海生工生物技术公司，经纯化后应用DNA测序仪进行基因序列测定。测序结果与网上基因库已知的碳青霉烯酶基因型序列作blast比对（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast），一致程度达到98％以上的基因序列则可判断为相同基因型。
　　结果:1、CRAB菌株的来源及科室分布:CRAB菌株主要存在于血液(58％)，其它依次为脑脊液(21％)，引流液(10.5％)、脓汁(8.8％)及分泌物(1.7％)。CRAB菌株的科室分布以外科ICU的检出率最高(59.6％)，其次为神经外科(19.3％)。2、CRAB药敏结果:57株CRAB中除碳青霉烯类抗菌药物全部耐药外，对其它β-内酰胺类药物和四环素耐药率达90％以上，对氨基糖甙类和喹诺酮类的耐药率均超过60％。3、57株CRAB碳青霉烯酶基因型:CRAB携带D类酶blaOXA-51的检出率为100％，blaOXA-23的检出率为96.5％;blaOXA-24的检出率为12.3％，其中3.5％的CRAB菌株单独携带blaOXA-24耐药基因，8.8％的CRAB同时携带blaOXA-24与blaOXA-23耐药基因;未发现携带blaOXA-58基因的CRAB菌株;A类酶基因型:blaPER-1的检出率为5.3％，全部与blaOXA-23以联合耐药的形式存在;未发现B类酶中携带blaVIM或blaIMP基因的菌株。
　　结论:1、本地区CRAB碳青霉烯酶基因型主要为baOXA-23，它可以与同类碳青霉烯酶blaOXA-24或不同类型的碳青霉烯酶blaPER-1之间出现联合耐药。2、部分CRAB菌株携带blaOXA-24基因，尚未出现广泛流行。3、未发现携带blaOXA-58基因的CRAB菌株。4、未发现携带金属酶基因的CRAB菌株。

目录

声明

摘要

英文缩略语

1 前言

2．1 材料

2．1．1 菌株来源

2．1．2 主要试剂

2．1．3 主要仪器

2．2 方法

2．2．1 菌株鉴定和药敏试验

2．2．2 DNA模板的制备

2．2．3 碳青霉烯酶耐药基因检测

2．2．4 PCR核酸测序及基因序列分析

2．2．5 统计学分析

3 结果

3．1 CRAB的标本分布和科室分布

3．2 CRAB药敏结果

3．3 CRAB碳青霉烯酶基因型分析

4 讨论

5 结论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述 碳青霉烯类耐药的鲍曼不动杆菌耐药机制研究进展

攻读学位期间取得的研究成果

致谢

个人简历