腺苷对猪DCD供胰低温机械灌注后胰岛细胞功能影响的实验研究

摘要

目的:
　　当前，心脏死亡供者(Donor after Cardiac Death，DCD)已成为国际上接受的三大捐赠者资源之一，其应用逐年增加，临床疗效得到许多国际权威机构的认可。然而，因为热缺血时间较长，DCD器官在移植术后所产生的原发性无功能(primary nonfunction，PNF)和移植物功能障碍(initial poor function，IPF)的几率比较高，因此器官的移植前的修复和保存尤为重要。
　　机械灌注不再是基础器官移植研究的一个新课题，特别是在已有近30年历史的肾移植领域。但是，这项研究一直保持在基础水平的研究，并没有广泛应用于临床实践，主要原因是受技术条件和设备技术水平的制约。近年来，随着器官移植需求量的增加，器官移植医生务必限制移植前移植物的丢失量并保证移植物的活力达到最大可利用率。并且新一代的灌注设备不断完善，机械灌注再次成为移植界热门话题。但在国内，胰腺的机械灌注刚刚起步。
　　目前器官保存液主要已UW液为主，但是其仅限于器官的冷保存，是否能在机械灌注中发挥其作用还有待研究。针对机械灌注对微循环要求的特点，如何使组织得到有效且充分的灌注，将是移植医生工作的重点。腺苷(ADO)是一种内生性的核苷。它能够参与到体内糖，蛋白质，脂肪等多种物质的代谢，改善机体代谢。它可使低温保存的胰腺在机械灌注时达到能量的供给作用。
　　方法:
　　1、以杂交猪（杜洛克、大白、长白）构建出DCD模型，采取机械灌注和单纯冷保存的方法，分析研究两者胰腺的病理学变化，观察机械灌注对胰腺保存的功效;
　　2、对比研究分析机械灌注不同时间后胰腺组织中其caspase-3的表达，反映不同时间的机械灌注对胰腺保存的作用;
　　3、分析研究经过低温机械灌注的方法，在不同时间段所获取供体猪的胰岛当量，胰岛纯度，活性以及胰岛素释放指数的情况，明确不同时间的低温机械灌注对猪DCD供胰提取胰岛质量的作用;
　　4、对比研究分析单纯UW液机械灌注组与UW液加腺苷机械灌注组提取胰岛当量，纯度，活性及胰岛素释放指数的变化，反映腺苷在机械灌注中对提取胰岛质量的作用，并应用微量透析技术进行检测。
　　结果:
　　病理学评分:单纯冷保存组为3.9±0.63，机械灌注组分为8.2±1.21，P＜0.05，有统计学意义。随着机械灌注时间的延长，细胞凋亡逐步出现，并且出现血管壁细胞，外分泌腺体细胞及胰岛细胞依次凋亡的顺序。机械灌注后，提取胰岛的当量、纯度、活性及胰岛素释放指数明显增多，对比未灌注组提取胰岛的质量存在明显的统计学意义。对比研究分析低温机械灌注后，不同时间段所提取猪DCD供胰的胰岛当量，胰岛纯度，活性以及胰岛素释放指数的情况，明确不同时间的低温机械灌注对猪DCD供胰提取胰岛质量的作用，得出结论。机械灌注后，提取胰岛当量，纯度，活性及胰岛素释放指数明显增多，对比未灌注组提取胰岛的质量存在明显的统计学意义。并且在机械灌注180分钟时，胰岛的质量达到最佳，针对机械灌注也存在冷缺血时间长的特点，如何使组织进行有效的能量供给，我课题组应用了腺苷改良灌注液。腺苷(ADO)是一种内生性的核苷。它能够参与到体内糖，蛋白质，脂肪等多种物质的代谢，改善机体代谢。它可使低温保存的胰腺在机械灌注时达到能量的供给作用。并且通过实验证实相同灌注时间后，对比单纯UW液灌注组，UW液加腺苷灌注组提取胰岛当量，纯度，活性及胰岛素释放指数明显增多，存在明显的统计学意义。并且通过微量透析技术加以证实。
　　结论:
　　对DCD供胰实行机械灌注180分钟，为最佳的灌注时间，使得胰腺的修复效果达到最佳，而组织水肿造成的胰岛破坏达到最低水平，提高胰岛的质量。机械灌注液中加入腺苷与单纯机械灌注相比，胰岛的数量、活性、纯度及功能明显提高。

目录

声明

摘要

英文缩略语

第一部分：机械灌注相对于单纯冷保存对猪DCD供胰的影响

1 前言

2．1 标本采集

2．2 材料与方法

2．3 结果评估

2．4 统计学分析

3 结果

3．1 HE染色下病理变化

3．2 图表总结

3．3 病理评分

3．4 统计学分析

4 讨论

5 结论

第二部分：不同时限机械灌注对猪DCD供胰影响

1 前言

2 材料和方法

2．1 标本采集

2．2 实验方法

2．3 结果评估

3．2 图表总结

4 讨论

5 结论

第三部分：不同时间低温机械灌注对猪DCD供胰胰岛功能的影响

1 前言

2．1 标本采集

2．2 实验方法

2．3 统计学分析

3．1 灌注前后胰腺质量的变化

3．2 灌注前后提取胰岛数量的变化

3．3 灌注前后胰岛提取效率的变化

3．4 灌注前后胰岛纯度的变化

3．5 灌注前后胰岛素释放指数的变化

4 讨论

5 结论

第四部分 加入腺苷改良机械灌注液后对胰岛提取的影响

1 前言

2．1 标本采集

2．2 实验方法

2．3 统计学分析

3 结果

3．1 灌注前后提取胰岛数量的变化

3．2 灌注前后胰岛提取效率的变化

3．3 灌注前后胰岛纯度的变化

3．4 灌注前后胰岛素释放指数的变化

3．5 代谢产物的检测

4 讨论

5 结论

本研究创新性的自我评价

参考文献

附录

攻读学位期间取得的研究成果

致谢

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