ER-α36在PC12细胞血清营养剥夺耐受性中的作用初探

摘要

研究表明，雌激素参与缺血性脑卒中的神经保护作用。雌激素主要与雌激素受体结合，通过基因组模式或非基因组模式发挥生物学效应。新近发现的ER-α36是ER-α一个亚型，它广泛表达在乳腺、卵巢、肝、骨等细胞和组织中，并可介导膜起始的雌激素信号通路。本室前期研究发现，ER-α36也广泛表达在脑内多个区域，但作用尚不明确。
　　 本实验利用RNA干扰技术建立的ER-α36基因敲低细胞系，通过免疫细胞化学、免疫细胞荧光、MTT、Hoechst染色、荧光素酶分析、Western blot等方法，探讨了ER-α36在PC12细胞血清营养剥夺耐受性中的作用，为临床预防和治疗缺血性脑卒中提供实验依据。
　　 结果：
　　 1.原代培养不同时间的皮层和海马神经元中均有ER-α36表达，且主要分布在胞浆和胞膜上，并与Caveolin-1共定位。原代培养的皮层神经元和海马神经元纯度较高，NSE免疫阳性率均达到97％。
　　 2.PC12细胞对血清营养剥夺的耐受具有明显的时间和血清浓度依赖性。细胞在含2.5％血清的无酚红培养基中生长速度减慢，其存活率与正常培养PC12细胞相比显著降低，以此可建立血清营养剥夺细胞模型；此外，细胞在血清剥夺(0.5％血清)2h时，不会发生凋亡。
　　 3.敲低ER-α36，降低了细胞对低浓度E2的敏感性，增强了细胞血清营养剥夺的耐受性。其中，pM和nM级别的E2对PC12细胞促增殖作用减弱；PC12细胞血清营养剥夺4h开始凋亡，敲低ER-α36后细胞血清营养剥夺8h开始凋亡。
　　 4.ER-α36介导E2激活的MAPK信号通路影日向Pc12细胞的营养剥夺(低血清)耐受性。在PC12细胞中转染ER-α36表达质粒后再分别用不同浓度E2处理，与未用E2处理组相比，低浓度E2增强荧光素酶活性，10pM最为显著ER-α36参与血清营养剥夺的细胞增殖和存活通路，并介导E2激活的MAPK/ERK和PI3K/Akt信号通路的交叉对话，同时介导低浓度E2激活的MAPK信号通路。
　　 结论：敲低ER-α36降低PC12细胞对低浓度E2的敏感性、增强细胞血清营养剥夺的耐受性；ER-α36参与E2激活的增殖信号通路影响PC12细胞血清营养剥夺(低血清)耐受性。