银屑病患者外周血中Th17和Treg细胞及其相关细胞因子的表达

摘要

银屑病(Psoriasis)是一种常见的慢性炎症性皮肤性疾病，关于其发病机制现认为CD4+T淋巴细胞(T helper cell)免疫功能异常在发挥重要作用，研究证实银屑病发病中存在辅助性T细胞1(Th1)/辅助性T细胞2(Th2)细胞平衡失调，且以Th1型反应为主。近年来发现两种与Th1和Th2细胞不同的T细胞亚群Th17和调节T细胞(Treg)细胞在银屑病发病机制中也可能发挥了重要的免疫学作用。
　　本研究的目的:研究银屑病患者外周血中Th17与Treg细胞及其特异性转录因子孤儿受体γ t(RORγ t)和叉头状转录因子(Foxp3) mRNA的表达与其细胞因子白介素17（IL-17）、转化生长因子-β(TGF-β)的表达情况，探讨Th17与Treg细胞与其相关因子在银屑病的发病机制中作用。
　　方法:将53例银屑病患者根据牛皮癣区和严重性指数(PASI)进行分组;采用流式细胞术检测银屑病患者和25例健康对照者外周血中Th17和Treg细胞的比例;反转录-聚集合酶链式反应(RT-PCR)检测RORγ t和Foxp3 mRNA的表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中相关细胞因子IL-17、TGF-β的水平;各组数据之间进行统计学比较分析。
　　结果:流式细胞检测结果显示与对照组相比，银屑病患者组Th17细胞比例显著上升，且重度组与轻度组间也有显著性差异（P＜0.05）;而重度银屑病患者Treg细胞数相比健康对照组与轻度组降低，差异有统计学意义(P＜0.05); PT-PCR结果显示重度银屑病患者组RORγ t的mRNA水平高于轻度组和对照组(P＜0.05)，且轻度组与对照组之间也存在显著性差异(P＜0.05)。而重度银屑病患者Treg细胞的转录因子Foxp3 mRNA表达却显著低于对照组和轻度组(P＜0.05)。ELISA结果显示银屑病患者血浆中IL-17表达水平较对照组明显增高，且重度组IL-17的表达显著高于轻度组(P＜0.05)。而重度银屑病患者外周血TGF-β表达量降低(P＜0.05)，轻度组和正常对照组间无差别（P＞0.05）。
　　结论:银屑病患者外周血中Th17、Treg细胞及其相关因子异常表达，可见Th17与Treg细胞可能在银屑病的病情发展中起重要作用，为银屑病发病机制研究和临床治疗提供理论基础。

目录

声明

摘要

1 绪论

1．1 CD4+T细胞的研究概况

1．1．1 Th1和Th2细胞

1．1．2 Treg细胞

1．1．3 Th17细胞

1．1．4 Th17／Treg的分化及平衡调节

1．1．5 Th22细胞

1．1．6 各CD4+T细胞亚群的分化

1．2 CD4+T细胞在银屑病发病机制中的作用

1．2．1 银屑病发病机制认识的发展

1．2．2 Th1／Th2的平衡与银屑病

1．2．3 Th17细胞与银屑病

1．2．4 Treg细胞与银屑病

1．2．5 Th17／Treg平衡与银屑病

1．2．6 Th22细胞与银屑病

1．3 本论文研究目的与意义

1．4 本论文的主要研究内容

2 材料与方法

2．1 材料

2．1．1 研究对象

2．1．2 主要试剂

2．1．3 仪器设备及耗材

2．1．4 试剂配制

2．2 方法

2．2．1 标本采集和处理

2．2．2 密度梯度离心法分离外周血单个核细胞

2．2．3 Th17细胞的胞外染色

2．2．4 Th17细胞的刺激培养

2．2．5 Th17细胞的固定破膜及胞内染色

2．2．6 Treg细胞的胞外染色及溶血

2．2．7 Treg细胞的固定破膜及胞内染色

2．2．8 流式细胞仪检测

2．2．9 引物的设计与合成

2．2．10 RNA的提取(Trizol法)

2．2．11 反转录cDNA的合成

2．2．12 PCR扩增目标DNA

2．2．13 酶联免疫吸附法(ELISA)检测人白介素17(IL-17)浓度

2．2．14 酶联免疫吸附法(ELlSA)检测人转化生长因子(TGF-β)浓度

3 结果

3．1 银屑病患者外周血Th17细胞和Treg细胞的表达

3．2 银屑病患者外周血Foxp3、ROR γ t mRNA表达

3．3 银屑病患者外周血IL-17、TGF-β表达水平

4 讨论

结论

参考文献

附录A 流式细胞术检测辅助性T细胞(Th)胞内细胞制因子试剂配

附录B 酶联免疫吸附法(ELISA)检测人白介素17(IL-17)

攻读硕士学位期间发表学术论文情况

致谢