声明
摘要
1.绪论
1.1 KAI1/CD82的分子结构特点
1.2 KAI1/CD82基因表达的调节
1.3 KAI1/CD82的翻译后修饰
1.3.1 十六(烷)酰化
1.3.2 糖基化
1.4 参与免疫应答
1.4.1 与T细胞的免疫应答
1.4.2 与B细胞的免疫应答
1.5 参与调节细胞黏附
1.6 调节细胞的迁移
1.7 诱导细胞的凋亡
1.8 CD82与肿瘤的关系
1.9 展望
2 七鳃鳗CD82的分子克隆
2.1 材料
2.1.1 实验材料
2.1.2 仪器设备
2.1.3 药品及试剂
2.2 方法
2.2.1 引物设计
2.2.2 白细胞分离
2.2.3 脂肪体总RNA的提取
2.2.4 反转录成cDNA
2.2.5 PCR扩增
2.2.6 目的片段的回收
2.2.7 目的片段与载体连接及转化
2.2.8 阳性菌落的鉴定
2.2.9 重组质粒的提取及测序
2.3 结果
2.3.1 脂肪体总RNA的提取
2.3.2 日本七鳃鳗CD82的基因克隆
2.4 讨论
2.5 小结
3 CD82氨基酸序列的生物信息学分析
3.1 使用的在线网站和软件
3.2 结果
3.2.1 一级结构分析
3.2.2 功能结构域预测
3.2.3 二级结构预测
3.2.4 三级结构模拟
3.2.5 抗原表位预测
3.2.6 同源序列比对
3.2.7 保守性分析
3.2.8 系统发育分析
3.3 讨论
3.4 小结
4 半定量RT-PCR检测CD82在七鳃鳗各组织中的相对表达量
4.1 材料
4.1.1 实验材料
4.1.2 仪器设备
4.1.3 药品及试剂
4.2 方法
4.2.1 菌液刺激七鳃鳗
4.2.2 白细胞的分离及组织提取
4.2.3 白细胞及组织总RNA的提取
4.2.4 半定量RT-PCR法检测CD82在七鳃鳗中相对表达量
4.3 结果
4.3.1 七鳃鳗各组织总RNA提取
4.3.2 CD82在七鳃鳗不同组织中的相对表达量
4.4 讨论
4.5 小结
5 原核表达载体的构建
5.1 材料
5.1.1 仪器设备
5.1.2 药品及试剂
5.2 方法
5.2.1 设计引物
5.2.2 PCR扩增
5.2.3 目的片段的回收与双酶切
5.2.4 重组表达菌的鉴定
5.3 结果
5.4 讨论
5.5 小结
6 结论
本论文的创新点
参考文献
附录A 脂肪体cDNA文库中CD82的EST序列
附录B 不同物种的CD82的FASTA格式氨基酸序列
研究生期间发表文章及研究成果
致谢