胎鼠神经干细胞的培养、鉴定和HGF体外诱导分化的研究

摘要

目的1.建立昆明种胚胎小鼠神经干细胞培养、鉴定技术。 2.探讨肝细胞生长因子(HGF)对神经干细胞分化的诱导作用。 方法将孕14天小鼠引颈处死，分离取出胚鼠大脑皮层，制成单细胞悬液，采用无血清培养法，在表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维生长因子(bFGF)作用下培养，观察不同阶段的神经干细胞生长情况。连续传代，传至第三代后，加入不同浓度的肝细胞生长因子(HGF)，观察神经干细胞的分化情况。用免疫荧光技术对神经干细胞及分化情况进行鉴定，并进行统计学分析。 结果从胚胎小鼠大脑皮层中分离培养的神经干细胞能快速增殖形成悬浮生长的细胞团。经免疫荧光技术鉴定，细胞团Nestin抗体标记阳性且原代及传代细胞团Nestin抗体标记阳性细胞比例无明显变化(P＞0.05)，诱导分化后的细胞NSE和GFAP标记阳性。 去除表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维生长因子(bFGF)，加入不同浓度HGF，并诱导神经干细胞分化。用免疫荧光技术对神经干细胞的分化情况进行检测，计算NSE和GFAP阳性细胞率。实验表明随着HGF浓度逐渐增高，NSE阳性细胞率也逐渐增高，HGF组NSE阳性细胞率与对照组有统计学显著性差异(P＜0.05)，且同一浓度组中的NSE阳性细胞率较GFAP阳性细胞率有统计学显著性差异(P＜0.05)。 结论证实从胚胎小鼠大脑皮层分离培养出的细胞是神经干细胞，表明体外培养体系中培养的神经干细胞经传代培养后仍保持能干细胞的特性。HGF能诱导胚胎小鼠神经干细胞向神经元方向分化，且具有剂量依赖性。

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参考文献

综述 神经干细胞的研究进展

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