重组人腺病毒p53(rAd-p53)注射液对鼻咽癌细胞放射增敏作用的研究

摘要

放射治疗已成为肿瘤治疗的主要治疗手段，但同样治疗条件下，不同肿瘤患者即使肿瘤类型、病理分级、部位等都相同，治疗效果也存在较大差异，表明肿瘤细胞的内在放射敏感性(intrinsic radio-sensitivity)有显著不同。有关肿瘤内在放射敏感性的分子和细胞生物学基础的研究表明，放射治疗主要是引起肿瘤细胞DNA损伤和与细胞凋亡有关的基因或蛋白的改变，从而启动肿瘤细胞的凋亡过程。与细胞DNA双链断裂(double-strand breaks，DSB)损伤的修复能力有关的DNA-PK、Ku70、Ku80、ATM蛋白、p53蛋白，与细胞凋亡、周期调控有关的p53、p16、bcl-2、erbB-2等基因表达产物都被证明与肿瘤的放射敏感性有关[1-2]
　　 目的：评价重组人腺病毒p53(rAd-p53)注射液对鼻咽癌细胞株CNE2细胞放射敏感性的影响。
　　 方法：将CNE2细胞分为5组：空白组（B组）、对照组（C组）、加rAd-p53组（D组）、放疗组（R组）、联合治疗组（D+R组）。将rAd-p53转染入CNE2细胞后，通过MTT法检测不同浓度的rAd-p53对CNE2细胞的生长抑制率，筛选最适浓度；通过流式细胞仪检测rAd-p53以及联合放射治疗对CNE2细胞凋亡的影响。
　　 结果：
　　 1．实验前CNE2为贴壁的梭形细胞，细胞排列紧密，生长增殖速度快，每2～3天需传一代；在加入rAd-p5312h后镜下观察：细胞形态变为圆形，体积变小，细胞密度增加和细胞固缩，细胞膜和核膜完整，线粒体发生超浓缩和染色质进行性固缩，并向核周“崩溃”形成一个或多个块状结构、“致密球体”或向外“发芽”形成葡萄串样小球体。24h后镜下观察：视野模糊，细胞膜损伤、肿胀、裂解。
　　 2.MTT法检测发现rAd-p53对鼻咽癌细胞株CNE2细胞的生长抑制率随着rAd-p53注射液浓度的增加而增加，高浓度组的生长抑制率可达85.46％，具有良好的量效关系(P=0.000)，而且rAd-p53注射液联合放疗对CNE2细胞的最适浓度IC50为8.72×107VP/ml;
　　 3．流式细胞分析后得出：C组CNE2细胞的凋亡率为(5.363±0.347)%、D组CNE2细胞的凋亡率为(10.450±0.507)%、R组CNE2细胞的凋亡率为(20.373±0.970)%、D+R组CNE2细胞的凋亡率为(27.207±6.000)%(p＜0.05)。D+R组凋亡率增高明显。
　　 结论：
　　 1、rAd-p53注射液对鼻咽癌细胞株CNE2细胞有显著地抑制作用，且随着rAd-p53注射液药物浓度的增高抑制率明显增加，具有良好的量效关系
　　 2、放射治疗对鼻咽癌细胞株CNE2细胞具有杀伤作用，放射治疗联合rAd-p53注射液有放射增敏作用。
　　 3、本实验为临床课题的一部分，由于时间仓促，本人知识和技术水平有限，实验中有许多不足。有关rAd-p53注射液与放射治疗结合的剂量效应关系等问题有待于今后进一步研究。