G31P对体外培养HaCaT细胞及银屑病鼠模型中IL-8拮抗作用的实验研究

摘要

银屑病是一种常见并易复发的多基因缺陷的慢性、炎症性皮肤病，其发病机制目前尚未阐明。近年来，随着T细胞抑制剂环孢素A被发现可显著改善银屑病，银屑病被定义为T细胞介导的疾病。作为一种易复发的慢性炎症性疾病，银屑病在临床上表现出的红斑、脱屑及瘙痒等特点严重影响了患者的生活质量，其主要的组织病理特征除表皮细胞过度增殖、分化不全、真皮浅层毛细血管扩张、炎症细胞浸润及促组胺释放过量外，一个重要的表现为中性白细胞移入表皮，形成Munro微脓肿。IL-8被认为是中性粒细胞浸润、白细胞运输、多种细胞趋化及过度增殖的一个重要介质。
　　 目的：本实验我们通过体外培养HaCaT细胞及银屑病鼠模型探讨IL-8刺激HaCaT细胞增殖的作用；同时检测IL-8受体拮抗剂G31P对IL-8的拮抗作用。为开发治疗银屑病的药物奠定理论基础。
　　 方法：体外实验部分：将不同浓度的IL-8与HaCaT细胞共培养，用CCK-8法检测IL-8对HaCaT细胞增殖的刺激作用；将相同浓度的IL-8及其拮抗剂G31P置于HaCaT细胞中共培养，用CCK-8法检测HaCaT细胞的增殖情况，用RT-PCR法检测细胞中IL-8的mRNA水平，用ELISA法检测细胞上清液中IL-8的蛋白表达水平。体内实验部分：将适量浓度及体积的G31P通过皮内注射的方式注入银屑病鼠模型的小鼠耳部，用药21天后取鼠耳。RT-PCR法检测鼠耳中CXCL-1(IL-8)mRNA的表达水平变化，免疫荧光染色及HE染色观察鼠耳细胞因子标记物在实验组和对照组之间的区别以及鼠耳外观的形态改变。
　　 结果：1、不同浓度的IL-8对HaCaT细胞增殖均有促进作用，呈浓度依赖性。2、G31P可明显抑制IL-8所引起的HaCaT细胞的增殖；加入IL-8和G31P后细胞中mRNA和培养液中蛋白水平均明显降低。3、经过G31P处理过的鼠耳内CXCL-1(IL-8)的mRNA水平明显低于未用药的耳朵；而检测的细胞因子标记物较未用药的耳朵相比也明显减少；HE染色可见耳朵切片的表皮厚度及细胞数量和形态有明显差异。
　　 结论：
　　 1、IL-8可以促进表皮角质形成细胞大量增殖及大量分泌IL-8，它可以诱导单核细胞向巨噬细胞的转化，同时，它还可促血管增生，增加银屑病皮损处血供。
　　 2、在有效浓度下，IL-8可明显促进表皮细胞的增殖，并呈浓度依赖性，可能对临床银屑病皮损的产生起重要作用。
　　 3、G31P作为IL-8的竞争性受体拮抗剂，可直接通过结合位于角质形成细胞及中性粒细胞上的CXCR1/2受体，使其凋亡，抑制IL-8对于其他炎性细胞及淋巴细胞的趋化及活化功能，从而缓解银屑病样皮损的发生及进展。