EGF在糖尿病足溃疡创面愈合过程中的作用及其机制

摘要

目的:探讨表皮生长因子(EGF)对糖尿病足溃疡创面愈合的治疗效果及其作用机制。
　　方法:系统抽样的方法随机抽取新西兰实验兔70只，被选的实验兔体重大约在2.5至3.0kg，新西兰实验兔的性别不受限制。用高脂高糖的饲料喂养新西兰实验兔2个月。2月后，用生理盐水依比例配成2.5％四氧嘧啶，试验兔禁食6小时后向实验兔耳缘静脉注射以上配制的糖尿病诱导液，剂量为1次/3天、每次50mg/kg。第10天测空腹血糖＞11.1mmol/L入选模型，共有32只实验兔符合实验的纳入标准。符合标准的32新西兰兔随机分为两组:表皮生长因子组（A组）和对照组（B组），两组都16只。消毒后，在兔子大腿部造创，其标准为:实验用兔足背部切除10mm×7mm矩形区域全层皮肤，造创完成后，一组局部创口连续涂抹表皮生长因子(EGF)，用量从始至终为1ml，每天一次，作为A组;另一组为不施加干预的B组。实验过程中，饲养方法及卫生水平统一，保证其水槽不干、食槽盈满、卫生干净整洁，尽可能达到均衡，减少偏倚。健康健康新西兰大白兔糖尿病足溃疡造模后第7和第15天，各新西兰大白兔糖尿病足溃疡面用数码相机拍照，即刻记录创面愈合率及愈合面积。图像经图像处理软件Photoshop软件处理后分析计算出糖尿病足溃疡创面愈合率。计算公式为:创面愈合率=[（原创面面积-未愈合创面面积）/原创面面积）]。15天后，沿超出创面外缘2毫米处取下新愈合的创面肉芽组织并作Masson、HE染色、电镜观察及EGFmRNA检测。所得实验数据用Gel-Proanalyzer4.0软件进行灰度分析。所有实验数据的资料描述采用X±S（均数±标准差）的形式表示，样本统计量采用统计分析软件SPSS13.0软件。对照组与实验组比较前先对样本资料做正态分布检验及方差齐性检验，符合条件后做成组设计两样本t检验，实验设计为双尾双侧t检验，a值取0.05。
　　结果:(1) Masson、HE染色结果显示:与B组比较，A组溃疡愈合较好，肉芽生长迅速，成纤维细胞聚集成群，轮廓较清晰;细胞外基质较丰富，胶原纤维束排列密集而有序，可见大量血管生成，组织分层愈合良好。(2)电镜下:A组成纤维细胞体积大、形态完好、胞质内细胞器丰富，细胞周围可见大量胶原纤维排列整齐有序，B组成纤维细胞细胞数目较少，形态不规整，排列混乱无序，成纤维细胞周围胶原纤维稀疏、细胞内容物少;(3) EGF的mRNA检测发现:A组EGFmRNA的相对灰度值和B组EGFmRNA的相对灰度值经t检验有统计学意义(p＜0.05)，A组内源性EGFmRNA表达增高。
　　结论:EGF可以诱导角质细胞和纤维母细胞增生、使角质层增厚、刺激周围神经再生[6，7]。EGF不仅参与细胞增殖、迁移和分化功能的调节，而且是有效的促细胞分离原[1，2]。新西兰兔糖尿病足溃疡创面施加外源性EGF后内源性EGFmRNA的基因转录是增高的，试验初步证明外源性表皮生长因子和观察指标内源性表皮生长因子mRNA是相关的。可能的原理为外源性的表皮生长因子(EGF)可以促进EGFmRNA的转录和翻译，EGFmRNA更好的得到基因表达，从而刺激组织分泌EGF，分泌的EGF和表皮细胞及成纤维细胞膜相应的受体蛋白结合，主要参与细胞的增殖、迁移和分化功能的调节。完成胶原组织构建，速创面肉芽组织生成和上皮组织的形成，加速创面愈合速度，创面愈合质量[9,10,19]。这假设需要做进一步的单因素多水平的实验设计后回归分析。