基于氧化还原电位建立测定血清抗氧化能力的方法

摘要

目的:
　　本文基于氧化还原反应原理和氧化还原电位(Oxidation Reduction PotentialORP)，建立了三种准确，灵敏，精密度良好的测定人血清抗氧化能力的方法，以达到对机体氧化还原状态进行评价的目的。运用所建立的三种方法对2型糖尿病(T2DM)人的血清抗氧化能力进行测定，采用等位基因特异性PCR技术(AS-PCR)分析2型糖尿病人CETP基因TaqIB位点的多态性，旨在探讨机体抗氧化能力及CETP基因TaqIB多态性与2型糖尿病的相关性，评估两者对2型糖尿病的危险性。
　　方法:
　　1. 基于氧化还原电对(I2/KI)浓度比的对数与氧化还原电位（ORP）呈线性关系，血清与已知固定浓度比的I2/KI电对液反应后，电对液ORP值发生改变建立方法1。用血清和维生素C与I2/KI电对液进行反应，评价方法的准确性。按照NCCLS的EP5文件评价方法1的精密度。并测定糖尿病人的血清抗氧化能力来验证该方法潜在的临床应用价值。
　　2. 基于氧化还原电对(Fe3+/Fe2+)浓度比的对数与氧化还原电位(ORP)呈线性关系，血清与已知固定浓度比的Fe3+/Fe2+电对液反应后，电对液ORP值发生改变建立方法2。用血清和维生素C与Fe3+/Fe2+电对液进行反应，评价方法的准确性。多因素线性回归分析实验评价各因素对方法2的影响。并测定糖尿病人的血清抗氧化能力来验证该方法的潜在临床应用价值。
　　3. 基于氧化剂过氧化氢(H2O2)浓度的对数与氧化还原电位(ORP)呈线性关系，血清与已知固定浓度的过氧化氢反应后，电对液ORP值发生改变来建立方法3。用血清和维生素C与过氧化氢进行反应，评价方法3的准确性。多因素线性回归分析实验评价各因素对方法3的影响。并测定糖尿病人的血清抗氧化能力来验证该方法的潜在临床应用价值。
　　4. 从医院采集30例2型糖尿病人和30例健康体检者的血清，运用所建立的三种方法测定这两组人群的血清抗氧化能力。采用等位基因特异性PCR技术(AS-PCR)检测2型糖尿病人和健康体检组CETP基因TaqIB位点的多态性，探讨机体抗氧化能力及CETP基因TaqIB多态性与2型糖尿病的相关性。
　　结果:
　　1. 氧化还原电对(I2/KI)浓度比的对数与氧化还原电位(ORP)呈线性关系(R2=0.9970)。在电对液存在的条件下，血清与ORP呈线性关系(R2=0.9997)，维生素C与ORP呈线性关系(R2=0.9980)。精密度结果为100％血清水平批内CV为0.20％，批间CV为0.21％，天间CV为0.43％;50％血清水平批内CV为0.11％，批间CV为0.12％，天间CV为0.39％。糖尿病组和健康体检组的ORP值，糖尿病组为385.40±5.93 mv，正常对照组为380.72±5.54mv。结果有统计学差异(P＜0.05)。
　　2. 氧化还原电对(FeWFe2+)浓度比的对数与氧化还原电位(ORP)呈线性关系(R2=0.9987)。在电对液存在的条件下，血清与ORP呈线性关系(R2=0.9700)，维生素C与ORP呈线性关系(R2=0.9960)。多因素线性回归分析实验，血清、Fe3+、Fe2+三个变量对于ORP值的贡献，均具有统计学意义(P＜0.05)，其中Fe3+与ORP呈正相关，其贡献最大(β=0.7890)，血清和Fe2+与ORP呈反相关。糖尿病组和健康体检组的ORP值，糖尿病组为399.17±10.99mv，正常对照组为392.60±8.36mv，差别有统计学意义(P＜0.01)。
　　3. 氧化剂过氧化氢(H2O2)的浓度的对数与氧化还原电位(ORP)呈线性关系(R2=0.9991)。在过氧化氢存在的条件下，血清与ORP呈线性关系(R2=0.9890)，维生素C与ORP呈线性关系(R2=0.9750)。多因素线性回归分析实验，血清、过氧化氢、重复次数三个变量中，血清和过氧化氢对于ORP值的贡献具有统计学意义(P＜0.05)，重复次数无统计学意义(P=0.061)。其中血清与ORP呈负相关，贡献最大(β=-0.757)，过氧化氢与ORP呈正相关。糖尿病组和健康体检组的ORP值，糖尿病组为384.35±11.23mv，正常对照组为380.67±8.98mv，差别有统计学意义(P=0.015)。
　　4. 三种方法测定的30例2型糖尿病人血清抗氧化能力明显低于30例健康体检者血清抗氧化能力，差异有统计学意义(P＜0.05)。在两组中，TaqIB位点可检测出B1B1，B1B2，B2B2三种基因型，基因型频率(x2=1.153)及等位基因频率(x2=0)在两组间分布均无统计学意义(P＞0.05)。 Logistic回归分析表明CETP基因TaqIB突变位点与2型糖尿病无明显相关，血清抗氧化能力为2型糖尿病的危险因素(OR=1.029,95％CI:1.011～1.048)。
　　结论:
　　1. 初步建立了三种利用加入氧化还原电对液或过氧化氢并结合氧化还原电位(ORP)测定血清抗氧化能力的方法，方法适用于测定人血清抗氧化能力，具有潜在的临床应用价值。
　　2. 2型糖尿病人血清抗氧化能力明显低于健康体检人群，机体抗氧化能力为2型糖尿病的危险因素，提示2型糖尿病与机体抗氧化能力有关。

目录

声明

摘要

前言

参考文献

第一章 基于氧化还原电位(ORV)和氧化还原电对I2／KI测定人血清抗氧化能力

材料与方法

1．材料

2．方法

结果

讨论

参考文献

第二章 基于氧化还原电位(ORP)和氧化还原电对Fe3+／Fe2+测定人血清抗氧化能力

材料与方法

1．材料

2．方法

结果

讨论

参考文献

第三章 基于氧化还原电位(ORP)建立过氧化氢(H2O2)电位法测定人血清抗氧化能力

材料与方法

1．材料

2．方法

结果

讨论

参考文献

第四章 机体抗氧化能力及CETP基因TaqIB多态性与2型糖尿病的相关性

材料与方法

1．材料

2．方法

结果

讨论

参考文献

全文总结

工作展望

综述 机体抗氧化能力的评价方法

个人简历

致谢