P-gp1、Gst-π、P53和Ki-67蛋白表达与弥漫大B细胞淋巴瘤患者临床特征及化疗耐药相关因素研究

摘要

弥漫性大B细胞淋巴瘤(Diffuse Large B Cell Lymphoma，DLBCL)是最常见的非霍奇金淋巴瘤（Non-Hodgkin Lymphoma，NHL），约占NHL的32.5％，其侵袭性强，可侵犯身体多个部位，预后差，目前治疗DLBCL的方法以免疫化疗为主，约60％的患者可以通过免疫化疗治愈[1]。但约40％的患者因为多药耐药(Multiple Drug Resistance，MDR)导致肿瘤难治和复发。目前针对DLBCL的MDR的机制尚未明确，国内外有多项关于弥漫性大B细胞淋巴瘤中P-gp1、Gst-π、p53、Ki-67蛋白表达与预后和总生存期的关系的研究，但它们是否是化疗疗效的预测因素相关性的研究较少。
　　目的:
　　探讨弥漫大B细胞淋巴瘤患者肿瘤组织中P-gp1、Gst-π、p53及Ki-67蛋白的表达与患者的临床特征及初始化疗后完全缓解(CR+CRu)率或非完全缓解(非CR)率之间的相关性，推测化疗耐药的相关因素。为优化DLBCL的临床治疗方案提供参考。
　　方法:
　　本研究为回顾性研究，筛选2014年6月至2017年6月期间在大连医科大学附属第二医院住院治疗、且有足够的组织标本、临床病理特征及术后随访资料完整的、初治的、有可测量的病灶、接受标准R-CHOP方案化疗的未失访的DLBCL患者48例，术后无病灶、原发中枢神经系统的DLBCL患者排除在外。对入选病例通过门诊、住院及电话随访相结合的方式进行随访。随访内容包括乳酸脱氢酶、β2微球蛋白、血沉等血液化验检查及相关影像学检查（主要包括胸部CT、盆/腹部CT、骨ECT、内镜等）等信息，根据卢加诺缓解标准进行疗效评价。如果患者在治疗2周期后疗效稳定(SD)、治疗期间疾病进展(PD)或治疗结束后未达到完全缓解(CR)被定义为治疗失败和化疗耐药已经发生（非CR）。DLBCL患者组织标本石蜡切片采用SP免疫组化法(streptavidin-biotin immunostaining)检测P-gp1、Gst-π、p53和Ki-67蛋白的表达。经2名经验丰富的病理科医师对免疫组化进行定量分析。运用x2检验、Fisher精确检验分析P-gp1、Gst-π、p53和Ki-67蛋白表达水平与DLBCL临床病理特征参数和临床疗效之间的关系。
　　结果:
　　1.P-gp1、Gst-π、p53及Ki-67蛋白的表达水平与DLBCL临床病理特征之间的关系
　　1.1 P-gp1蛋白的表达水平与性别（p=0.889）、年龄（p=0.650）、结外侵犯(p=0.945)、B症状(p=1.000)、分期(p=0.285)、IPI评分(p=0.465)、LDH(p=0.629)、血清β2微球蛋白(p=0.268)、血沉(p=1.000)之间无明显相关性，各组差异均无统计学意义。
　　1.2 Gst-π蛋白的表达水平与性别(p=0101)、年龄（p=0.313）、结外侵犯(p=0.135)、B症状(p=0.152)、分期(p=0.329)、IPI评分(p=0.291)、LDH(p=0.447)、血清β2微球蛋白(p=0.135)、血沉(p=0.096)之间无明显相关性，各组差异均无统计学意义。
　　1.3 p53蛋白表达水平与性别(p=0.743)、年龄(p=0.743)、结外侵犯(p=0.884)、B症状（p=0.192）、分期(p=0.828)、IPI评分(p=0.343)、LDH(p=0.311)、血清β2微球蛋白(p=0.637)、血沉(p=0.730)之间无明显相关性，各组差异均无统计学意义。
　　1.4 Ki-67蛋白的表达与血沉存在相关性，差异存在统计学意义(p=0.004)。DLBCL患者血沉越快，Ki-67的表达水平越高。性别(p=0.155)、年龄(p=0.343)、结外侵犯(p=0.097)、B症状(p=0424)、分期(p=0.657)、IPI评分(p=0.780)、LDH(p=0.903)、血清β2微球蛋白（p=0.275）与Ki-67蛋白的表达水平无明显相关性，各组差异均无统计学意义。
　　2.DLBCL的临床特征与近期疗效之间的关系:48例DLBCL患者的分期与近期疗效之间存在相关性，差异有统计学意义(p=0.020)，早期（Ⅰ-Ⅱ期）患者的完全缓解率明显高于晚期（Ⅲ-Ⅳ期），表明分期越早，近期疗效越好。患者的性别(p=0.422)、年龄(p=0.482)、生发来源(p=0.738)、结外侵犯(p=0.961)、B症状(p=0.181)、IPI评分(p=0.827)、LDH(p=0.961)、血清β2微球蛋白(p=0.827)、血沉(p=0.054)与近期疗效无相关性。
　　3.P-gp1、Gst-π、p53及Ki-67蛋白的表达水平与近期疗效之间的关系:P-gp1蛋白和Ki-67蛋白过表达与较差的临床反应相关(p=0.034，p=0.014)，Gst-π和p53蛋白过表达与临床反应之间的关联无统计学意义(p=0.295，p=0.100)。Ki-67与P-gp1共表达及P-gp1与p53共表达与较差的临床反应相关(p=0.000，p=0.015)，P-gp1与Gst-π、Ki-67与Gst-π、Ki-67与p53、p53与Gst-π共表达蛋白质与临床反应之间的关联无统计学意义(p=0.184，p=0.464，p=0.152，p=0.509）。
　　4.DLBCL患者GCB及Non-GCB两亚组之间P-gp1、Gst-π、p53及Ki-67蛋白表达情况:根据Hans分型方法将患者分为GCB型及Non-GCB型两类，其中GCB型12例(25％)，Non-GCB型36例(75％)，二者比例1∶3。48例DLBCL患者的P-gp1蛋白(p=0.240)、Gst-π蛋白(p=0.743)、p53蛋白(p=0.726)及Ki-67蛋白(p=1.000)与生发来源之间无明显相关性，各组差异均无统计学意义。
　　结论:
　　1.血沉快的DLBCL患者Ki-67蛋白的表达高，血沉可能是影响Ki-67蛋白表达的相关因素。
　　2.P-gp1蛋白及Ki-67蛋白高表达及二者共表达的DLBCL患者的近期疗效差，可能是化疗耐药的因素。P-gp1与p53共高表达的DLBCL患者的近期疗效差，可能是化疗耐药的因素。
　　3.分期晚的DLBCL患者的近期疗效较差，可能是影响DLBCL患者近期疗效的相关因素。血沉快的DLBCL患者近期疗效相对较差，有影响DLBCL患者近期疗效的趋势。

目录

声明

摘要

一、前言

二、资料与方法

1．材料

1．1 病例资料

1．2 仪器与试剂

2．方法

2．1 免疫组化染色

2．2 免疫组化结果判定

3．统计分析方法

三、结果

1．2 Gst-π蛋白的表达水平与DLBCL临床病理特征之间的关系

1．3 p53蛋白的表达水平与DLBCL临床病理特征之间的关系

1．4 Ki-67蛋白的表达水平与DLBCL临床病理特征之间的关系

2．DLBCL临床病理特征与近期疗效之间的关系

3．1 P-gp1，Gst-π，p53及Ki-67蛋白的表达水平与近期疗效之间的关系

3．2 共表达蛋白与近期疗效之间的关系

4．DLBCL患者GCB及Non-GCB两亚组之间P-gp1、Gst-π、p53及Ki-67蛋白表达情况

四、讨论

五、结论

参考文献

综述

攻读学位期间发表论文情况

致谢