中药千层塔中生物碱成分的色谱分离方法研究

摘要

本论文针对生物碱类化合物色谱分离的难点，以中药千层塔提取物为研究对象，运用高效液相色谱法，分别从石杉碱甲定量测定、不同模式的二维正交液相色谱方法建立和主要化合物的纯化制备三个方面展开研究。
　　首先发展了一种快速定量测定中药千层塔中石杉碱甲含量的反相高效液相色谱方法。千层塔提取物经甲醇/水/甲酸(10/90/0.2，v/v/v)提取并定容后，过膜直接分析。色谱分离选用XCharge C18(150 mm×4.6 mm I.D.，5μm)色谱柱，以水（含0.1％三氟乙酸）和乙腈（含0.09％三氟乙酸）为流动相进行梯度洗脱，流速为2 mL/min，310nm波长下检测，可在10 min内完成石杉碱甲的快速分离分析。通过对该方法进行标准曲线、仪器的精密度、定量方法的稳定性和加标回收率四部分的考察，结果显示该方法的准确度和灵敏度均符合实际样品检测规定，从而很好地提高千层塔提取物中石杉碱甲含量测定的效率，为千层塔提取物质量控制提供了一种有效的分析检测方法。
　　然后根据反相色谱、离子交换色谱和混合模式色谱不同的作用机理，针对千层塔提取物中生物碱成分，分别构建了XCharge C18/XAqua C3、XCharge C18/XCharge SCX、XCharge C18/C18WCX三种不同模式的二维分离方法，并对其正交性进行了考察。结果表明，各系统均高度正交，从而可以满足千层塔提取物中生物碱成分的高效分离需求。
　　最后运用所建立的反相/反相二维液相色谱方法，实现了千层塔提取物实际样品的分离制备。并通过质谱和核磁的结构表征，确定了石杉碱甲和石杉碱乙两个活性组分。

目录

声明

摘要

引言

1 文献综述

1．1 中药千层塔研究概况

1．1．1 千层塔中化学成分研究

1．1．2 石杉碱甲性质和药理活性

1．1．3 石杉碱甲研究现状

1．2 二维正交液相色谱研究

1．2．1 二维液相色谱技术简介

1．2．2 二维液相色谱分离模式

1．2．3 二维液相色谱在中药分析中的应用

1．3 生物碱的液相色谱分离

1．3．1 生物碱的液相色谱分离方法

1．3．2 生物碱反相色谱分离难点的根源及解决对策

1．4 本论文的选题思路

2 高效液相色谱法定量测定中药千层塔提取物中的石杉碱甲

2．1 实验部分

2．1．1 仪器和试剂

2．1．2 样品准备

2．1．3 高效液相色谱分析条件

2．2 结果与讨论

2．2．1 流动相的优化

2．2．2 色谱柱的筛选

2．2．3 标准曲线

2．2．4 仪器精密度

2．2．5 方法稳定性

2．2．6 加标回收率

2．2．7 千层塔提取物中石杉碱甲含量的测定

2．3 本章小结

3 千层塔提取物二维液相色谱分离方法的构建

3．1 实验部分

3．1．1 仪器与试剂

3．1．2 千层塔提取物样品溶液的配制

3．1．3 高效液相色谱分析条件

3．2 结果和讨论

3．2．1 千层塔提取物在单维液相色谱柱上的分离

3．2．2 二维反相／反相模式液相色谱系统的分离结果

3．2．3 二维反相／离子交换模式液相色谱系统的分离结果

3．2．4 二维反相／混合模式液相色谱系统的分离结果

3．3 本章小结

4 千层塔提取物中化合物的纯化制备

4．1 实验部分

4．1．1 仪器与试剂

4．1．2 千层塔提取物样品溶液的制备

4．1．3 高效液相色谱分析条件

4．1．4 组分接取方式

4．2 结果和讨论

4．2．1 千层塔提取物在XCharge C18色谱柱上的一维制备

4．2．2 Fr．16组分在XAqua C3反相色谱柱上的二维制备

4．2．3 化合物表征

4．3 本章小结

结论

参考文献

附录A 石杉碱甲的1H NMR

攻读硕士学位期间发表学术论文情况

致谢