极端温度条件对大鼠调节性T细胞影响的研究

摘要

目的：探讨环境温度发生骤然变化时大鼠CD4+、CD4+CD25+、CD4+CD25+Foxp3+淋巴细胞数量的变化规律，为突然气温变化所长生的感染性及免疫性相关疾病的防治提供新的思路和实验依据。
　　 方法：①将252只9-15周龄雄性SD大鼠，体重198-378克(275.24g±35.73g)应用人工气候培养箱制作骤降温寒冷和骤升温极热大鼠模型；②大鼠随机分为正常温度(20℃)、骤降温(4℃)和骤降温(-12℃)、骤升温(37℃)等四组，每个温度组又设立对照组、Con-A组、LPS组等三个亚组，每个亚组观察1h、4h、8h、12h、24h、48h和168h七个时间点，每个时间点3只SD大鼠；③观察结束后给大鼠腹腔注射水合氯醛全身麻醉，颈动脉取血，经EDTA抗凝，离心取血浆；④PE-CD25+PE-Cy5-CD4+FITC-Foxp3抗大鼠单克隆抗体免疫细胞化学染色标记T淋巴细胞表面CD4、CD25，以及T淋巴细胞胞浆Foxp3抗原分子；⑤流式细胞仪检测大于30000细胞，计数CD4+、CD4+CD25+、CD4+CD25+Foxp3+细胞阳性率；⑥统计学处理：使用SPSS17统计软件进行，实验结果以均数±标准差(()±SD)表示，统计结果使用ANOVA法进行方差分析，LSD法进行t-检验。
　　 结果：⑴CD4+在非刺激条件下不同时间、不同温度表达变化差异很大，其中在8h、12h、48h、168h不同温度组之间存在显著差异(P<0.05)，而20℃、-12℃、37℃时，不同时间组之间也存在显著差异(P<0.05)。在37℃、4℃、-12℃时，4h、48h组低于正常对照组，以前者为甚。⑵CD4+在LPS刺激条件下不同时间、不同温度表达变化差异较大，其中在8h、168h不同温度组之间存在显著差异(P<0.05)，而4℃、-12℃、37℃时，不同时间组之间也存在显著差异(P<0.05)。在-12℃时，1h、168h高于正常对照组，37℃时，4h、48h低于正常对照组。⑶CD4+在Con-A刺激条件下不同时间、不同温度表达变化差异较大，其中在24h不同温度组之间存在显著差异(P<0.05)，而20℃、-12℃时，不同时间组之间也存在显著差异(P<0.05)。在4℃、-12℃时，4h、168h组高于正常对照组。⑷20℃时，8h、24h、48h时间点，Con-A和LPS刺激组低于正常对照组(P<0.05)，1h、12h、168h时间点，Con-A和LPS刺激组高于正常对照组，并以Con-A刺激组较为显著。⑸4℃时，1h、4h、8h、168h时间点，Con-A和LPS刺激组高于正常对照组，而12h、24h、48h时间点，Con-A和LPS刺激组低于正常对照组。⑹-12℃时，除48h时间点外，Con-A组均低于正常对照组，而4h、24h、168h时间点，LPS刺激组低于正常对照组。⑺37℃时，1h、48h时间点，LPS刺激组低于正常对照组。⑻CD4+CD25+在非刺激条件下不同时间、不同温度表达变化差异很大，其中1h、12h、168h组不同温度组之间存在显著差异(P<0.05)，而-12℃、37℃组，不同时间组之间也存在显著差异(P<0.05)。4℃时，1h、12h、24h、48h组低于正常对照组，-12℃时，12h、168h组低于正常对照组，37℃时，1h、48h组低于正常对照组，以后者较为显著。⑼CD4+CD25+在LPS刺激条件下不同时间、不同温度表达变化差异很大，其中1h、4h、8h、168h组不同温度组之间存在显著差异(P<0.05)，而-12℃、37℃组，不同时间组之间也存在显著差异(P<0.05)。4℃时，4h、12h、24h、48h组低于正常对照组，-12℃时，12h、168h低于正常对照组，37℃时，1h、48h组低于正常对照组，以后者较为显著。⑽CD4+CD25+在Con-A刺激条件下不同时间、不同温度表达变化差异很大，其中1h、8h、24h、168h不同温度组之间存在显著差异(P<0.05)，而37℃、-12℃组，不同时间组之间也存在显著差异(P<0.05)。-12℃时，12h、48h、168h组低于正常对照组，37℃时，1h、48h组低于正常对照组。⑾20℃时，1h、24h时间点，Con-A刺激组低于正常对照组，1h、12、168h时间点，LPS刺激组低于正常对照组，并以Con-A刺激组较为显著。⑿4℃时，8h、168h时间点，正常对照组与Con-A和LPS刺激组之间有差异(P<0.05)，但4h、8h、24h时间点Con-A刺激组低于正常对照组。⒀-12℃时，4h、12h时间点，正常对照组与Con-A和LPS刺激组之间有差异(P<0.05)，但12h、24h时间点Con-A和LPS刺激组均显著低于正常对照组。⒁37℃时，LPS刺激组48h、168h高于正常对照组。⒂CD4+CD25+Foxp3+在非刺激条件下不同时间、不同温度表达变化差异很大，其中4h、12h、24h、168h不同温度组之间存在显著差异(P<0.05)，而-12℃、37℃，不同时间组之间也存在显著差异(P<0.05)。4℃时，1h、12h组高于正常对照组，4h、8h、24h、48h、168h低于正常对照组；-12℃时1h、168h低于正常对照组；37℃时，4h、8h、48h、168h低于正常对照组，1h、12h、24h高于正常对照组；-12℃降低较为显著。⒃CD4+CD25+Foxp3+在LPS刺激条件下不同时间、不同温度表达变化差异较大，其中168h，不同温度组之间存在显著差异(P<0.05)，而20℃、-12℃、37℃，不同时间组之间也存在显著差异(P<0.05)。在4℃时，1h、168h组低于正常对照组；-12℃时，4h、24h组高于正常对照组，在1h、8h、12h、48h、168h组低于正常对照组；37℃时，4h、12h、24h组高于正常对照组，1h、8h、48h、168h组低于正常对照组。⒄CD4+CD25+Foxp3+在Con-A刺激条件下不同时间、不同温度表达变化差异较大，其中8h、12h，不同温度组之间存在显著差异(P<0.05)，而-12℃、37℃时，不同时间组之间也存在显著差异(P<0.05)。在4℃时，1h、168h组低于正常对照组；-12℃时，1h、168h组低于正常对照组；37℃时，12h组高于正常对照组，1h、4h、8h、48h、168h组低于正常对照组。⒅20℃时，12h、24h时间点，正常对照组与Con-A和LPS刺激组之间有差异(P<0.05)，8h、12h、24h、48h时间点，Con-A刺激组明显高于正常对照组；⒅4℃时，4h、8h时间点正常对照组与Con-A和LPS刺激组之间有差异(P<0.05)，24h、48h时间点，Con-A刺激组明显高于正常对照组；而24h、48h、168h时间点，LPS刺激组高于正常对照组。⒆-12℃时，1h、48h时间点，正常对照组与Con-A和LPS刺激组之间有差异(P<0.05)，但1h、48h时间点，Con-A刺激组均较正常对照组高，24h、48h时间点，LPS刺激组均明显低于正常对照组。⒇37℃时，4h、12h、168h时间点，正常对照组与Con-A和LPS刺激组之间有差异(P<0.05)，而4h、48h时间点，Con-A刺激组在明显高于正常对照组。
　　 结论：①非刺激条件下，在168小时中，极端温度(-12℃、37℃)均上调了CD4+辅助性T细胞，极端温度(-12℃、37℃)均下调了CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞。②极端温度(-12℃、37℃)条件下，Con-A刺激抑制了CD4+辅助性T的表达。③极端温度(-12℃、37℃)条件下，LPS刺激抑制了CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的表达，但是Con-A刺激在极冷温度组中是加强了CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的表达，而在极热温度组呈现的是先加强后抑制的结果。