胸腺素β4对人增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成和CTGF表达的影响

摘要

目的:
　　拟通过观察人增生性瘢痕成纤维细胞(hypertrophicscar fibroblasts HSFB)经胸腺素β4(thymosin beta4)干预后，检测其Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的生成水平及表达结缔组织生长因子(connective tissue growth factor CTGF)的变化，以期了解胸腺素β4在病理性瘢痕发病中的作用机制。
　　方法:
　　标本来自本院整形科的患者（伤后半年内），采用组织块消化法培养细胞。成纤维细胞培养至3-6代细胞后进行实验，共分成5组，其中空白对照组，加入无血清的培养基;实验组:加入不同浓度的胸腺素β4（0.05、0.1、1、5μg/mL）无血清培养基作用培养6小时。(1)采用ELISA法检测细胞上清液中Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的含量;(2)通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法观察结缔组织生长因子(CTGF) mRNA的表达;(3)采用蛋白印迹法(Western blot)观测CTGF蛋白的表达。
　　结果:
　　(1)各实验浓度的胸腺素β4作用6小时后Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白分泌的值为:5μg/ml组（0.111±0.004、0.112±0.010），1μg/ml组（0.113±0.005、0.140±0.030），0.1μg/ml组（0.114±0.006、0.178±0.010），0.05μg/ml组（0.117±0.004、0.190±0.016），空白组（0.154±0.105，0.222±0.003），各实验组与对照组差异有统计学意义(P＜0.05)。结果显示，各实验浓度胸腺素β4作用后增生性瘢痕成纤维细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的分泌量减少。
　　(2)各实验浓度的胸腺素β4作用6小时后(CTGF) mRNA表达灰度比值为:5μg/ml组（0.556±0.050），1μg/ml组(0.638±0.038),0.1μg/ml组（0.730±0.026），0.05μg/ml组（0.873±0.035），空白组（1.132±0.074），各实验组与对照组差异有统计学意义(P＜0.05)。结果显示，各实验浓度（0.05、0.1、1、5μg/mL）胸腺素β4作用后增生性瘢痕成纤维细胞CTGFmRNA表达降低。
　　(3)各实验浓度的胸腺素β4作用6小时后(CTGF)蛋白表达灰度比值为:5μg/ml组（0.510±0.044），1μg/ml组(0.532±0.026),0.1μg/ml组（0.658±0.032），0.05μg/ml组（0.743±0.035），空白组（0.953±0.040），各实验组与对照组差异有统计学意义(P＜0.05)。结果显示，各实验浓度(0.05、0.1、1、5μg/mL)胸腺素β4作用后均可以引起增生性瘢痕成纤维细胞CTGF蛋白表达降低。
　　结论:
　　胸腺素β4能剂量依赖性地降低增生性瘢痕成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的分泌及结缔组织生长因子(CTGF)的表达。我们推认:胸腺素β4可能是通过这条途径来影响瘢痕生成。

目录

声明

摘要

中英文对照

第1章 引言

第2章 材料及方法

2．1 主要实验仪器

2．2 主要实验试剂

2．3 主要溶液的配置

2．4 试验步骤

2．4．1 人增生性瘢痕成纤维细胞的分离及培养

2．4．2 ELISA法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的分泌量

2．4．3 RT-PCR法检测CTGFmRNA的表达

2．4．4 蛋白印迹法检测CTGF蛋白的表达

2．5 统计学处理

第3章 结果

3．1 成纤维细胞的分离培养

3．2 Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的分泌量

3．3 CTGFmRNA表达

3．4 CTGF蛋白表达

第4章 讨论

4．1 胸腺素β4的生物活性与其临床应用

4．2 胸腺素β4对增生性瘢痕成纤维细胞的胶原合成的影响

4．3 胸腺素β4对增生性瘢痕成纤维细胞CTGF因子表达的影响

第5章 结论

致谢

参考文献

攻读学位期间的研究成果

综述 胸腺素β4研究概况及展望