高糖和血管紧张素Ⅱ通过TLR4途径协同刺激大鼠肾小球系膜细胞炎症因子的表达及干预研究

摘要

目的:探讨高糖和血管紧张素Ⅱ是否可以协同刺激TLR4的表达及信号通路的激活，观察厄贝沙坦是否下调TLR4的表达，以及血管紧张素Ⅱ是否为TLR4的配体及AT1R与TLR4之间的可能协同关系。
　　方法:研究对象为大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)。细胞同步化后分组:正常对照组(5.6 mM D-glucose)、高糖组(25 mM D-glucose)、血管紧张素Ⅱ(10-7M)组、高糖+血管紧张素Ⅱ组、AngⅡ(10-7 M)+厄贝沙坦(10-5 M)组、AngⅡ+厄贝沙坦(10-5 M)+TLR4阻断剂(10 ug/ml)组。采用real-time PCR，westernblot检测TLR4，MyD88mRNA及蛋白的表达变化，分别收集细胞上清液用ELISA检测IL-6、MCP-1蛋白的表达。
　　结果:高糖和血管紧张素Ⅱ分别刺激肾小球系膜细胞12小时后TLR4、MyD88mRNA表达明显增加，刺激24小时细胞上清液IL-6、MCP-1的表达亦显著增加，与正常对照组相比差异显著（P＜0.01）。高糖和血管紧张素Ⅱ共同刺激HBZY-1细胞，下游因子MyD88mRNA及蛋白，炎症因子IL-6，MCP-1表达进一步增加，差异有统计学意义(P＜0.01)。厄贝沙坦可以部分阻断由AngⅡ刺激的TLR4信号通路的激活，厄贝沙坦协同TLR4阻断剂干预HBZY-1可以进一步下调MyD88及其下游因子的表达。
　　结论:
　　1、高糖和AngⅡ可以通过TLR4/MyD88信号通路诱导炎症因子表达增加，且二者之间存在协同作用。AngⅡ可能为TLR4的另一配体。
　　2、厄贝沙坦通过阻断TLR4受体下调炎症因子的表达。我们推测TLR4与AT1R之间在细胞信号传导中可能存在协同机制。

目录

声明

摘要

英汉缩略语名词对照

第1章 引言

第2章 高糖和血管紧张素Ⅱ通过TLR4协同刺激大鼠肾小球系膜细胞炎症因子的表达及干预研究

2．1 材料

2．1．1 细胞株

2．1．2 主要试剂

2．1．3 主要仪器及耗材

2．2 方法

2．2．1 主要溶液的配置

2．2．2 基本细胞实验

2．2．3 实验分组

2．2．4 荧光定量PCR(real-time PCR)检测上述不同处理组TLR4、MyD88 mRNA的相对表达量的变化

2．2．5 western blot分析各处理组TLR4、MyD88蛋白的相对表达量

2．2．6 ELISA分析各处理组细胞上清液中IL-6、MCP-1蛋白的表达量的变化

2．2．7 统计学处理

2．3 结果

2．3．1 RNA溶度和纯度的检测

2．3．2 real-time PCR检测TLR4、MyD88 mRNA相对表达量结果

2．3．3 western blot检测TLR4、MyD88蛋白表达结果

2．3．4 ELISA检测各组细胞上清液IL-6、MCP-1蛋白的表达变化

2．4 讨论

第3章 结论

致谢

参考文献

攻读学位期间的研究成果

综述 TLR4／MyD88信号通路在糖尿病肾病中的研究进展