基于适体技术化学发光检测生物小分子腺苷

摘要

本论文是基于适体技术化学发光检测生物小分子腺苷的研究,主要以腺苷为研究对象,羧基修饰的磁性微球作为分离载体,通过氨羧反应将适体连接于磁性微球上,再通过碱基配对原则连接上报告序列,由于配体腺苷的竞争作用,导致连接于磁性微球上的化学发光物质减少,信号减弱,从而间接实现腺苷的检测。论文通过实验构建了三种检测方法,具体实验方法如下:
　　第一种检测方法是使用辣根过氧化物酶化学发光体系检测。实验优化了羧基修饰的磁性微球、氨基适体、和链霉亲和素修饰辣根过氧化物酶的量、考察了尿苷、胞苷及鸟苷对腺苷适体的选择性。结果发现腺苷浓度在1×10-9 mol/L~10-4 mol/L范围内,化学发光信号和腺苷浓度线性关系良好,腺苷的最低检测浓度达到1pmol/L;并对实际尿样也进行了检测和回收率实验,结果表明该法具有一定的可行性;
　　第二种检测方法采用液溴-金纳米粒子化学发光体系检测,建立了基于适体-金纳米粒子化学发光检测腺苷的新技术,实验优化了羧基修饰的磁性微球、氨基适体、报告序列和金纳米粒子标记链霉亲和素金的量,最后在进行了选择性实验后对实际尿样中的腺苷进行了检测,此外论文中的金纳米粒子是通过柠檬酸钠还原氯金酸制备的,通过螯合反应制备链霉亲和素标记金纳米粒子。实现化学发光间接检测生物小分子腺苷;
　　第三种检测方法是在上部分研究的基础上,建立了金纳米粒子经羟胺-氯金酸体系放大,使鲁米诺化学发光体系发光的催化能力显著增大,从而达到提高灵敏度的作用。同样对实验中所需反应条件进行了优化考察和选择性实验。同时在最优实验条件下实现了对腺苷的检测,其最低检测限高达到了100 fmol/L;并通过特异性实验、回收率实验证明这一检测方法的选择性良好,稳定性和重复性都符合要求。也实现了肿瘤患者实际尿样中腺苷的检测,获得满意结果。因此本方法操作简单、灵敏度高有望为临床诊断疾病提供有利分析数据。

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第1章 绪论

1.1 引言

1.2 腺苷检测方法研究进展

1.3 化学发光金纳米粒子反应体系

1.4 主要研究内容及创新点

第2章 实验材料、仪器与检测方法

2.1 实验材料与仪器

2.2 标准曲线绘制方法

第3章 基于核酸适体辣根过氧化物酶标记的化学发光检测腺苷

3.1 引言

3.2 检测原理

3.3 实验步骤

3.4 结果与讨论

3.5 小结

第4章 基于适体与金纳米粒子标记的化学发光检测腺苷

4.1 引言

4.2 检测原理

4.3 实验步骤

4.4 结果与讨论

4.5 小结

第5章 羟胺放大金纳米的化学发光检测腺苷

5.1 引言

5.2 检测原理

5.3 实验步骤

5.4 结果与讨论

5.5 小结

第6章 总结与展望

6.1 总结

6.2 展望

致谢

参考文献

攻读学位期间的研究成果