湖北五峰土家族妇女HPV16型E7抗原限制性CTL表位的初步研究

摘要

目的:
　　初步研究湖北五峰土家族妇女人乳头瘤病毒16型E7抗原限制性细胞毒性T淋巴细胞表位,为该地区远期表位抗原的特异性鉴定和临床研究提供靶肽。
　　方法:
　　使用NetMHCpan软件预测HPV16型E7抗原CTL表位,采用标准的Fmoc方案合成多肽,产物采用RP-HPLC纯化、分析,并进行质谱分析鉴定;选取湖北五峰县土家族健康妇女和原发性宫颈癌各30名并提取外周血DNA,使用按照优诺基 HLA-SSO流式荧光微珠基因分型试剂盒进行 HLA分型,筛选出HLA-A*02+健康妇女和 HLA-B*07+宫颈癌患者各5名,采集外周血单个核细胞(PBMCs)用E7肽体外刺激进行免疫学实验,采用ELISOT技术检测IFN-γ斑点形成细胞数(Spots Forming Cells,SFCs)水平的差异并进行统计学分析。
　　结果
　　经RP-HPLC纯化后,多肽产物纯度均在95％以上,采用质谱法鉴定出多肽实测分子量与理论值相吻合,鉴定为高纯度的目标肽。
　　E7肽体外刺激 HLA-A*02+健康人PBMCs诱导机体产生了显著的CTLs反应,IFN-γ斑点形成细胞数目明显。组间差异用方差分析,组间差异有统计学意义(F=15.17,P<0.001),两两比较进行 LSD检验,与阴性对照组比较,实验组差异均有统计学意义,其中以P2:E741-55、P4:E751-65差异最显著(P<0.05),二者无显著性差异。
　　E7肽体外刺激 HLA-B*07+宫颈癌患者 P BMCs未能诱导机体产生显著的CTLs反应,INF-γ斑点形成细胞数目少,组间差异用方差分析,组间差异有统计学意义(F=40.26,P<0.001),两两比较进行LS D检验,与阴性对照组比较,以P5:E766-80差异最显著,且有统计学意义(P<0.05)。
　　HLA-A*02+健康人与HLA-B*07+宫颈癌患者ELISPOT结果提示INF-r斑点形成细胞数目有明显差异,且差异性有统计学意义(F=268.82,P<0.001)。
　　对不同多肽诱导机体产生 CTLs反应结果进行 SNK检验,P2:E741-55、P4:E751-65和P5:E766-80三条多肽对结果的影响最明显,与其他多肽比较差异有统计学意义(P<0.05),但三者间尚不能认为有统计学差异。
　　结论:
　　HLA-A*02能有效呈递HPV16型E7抗原肽诱导机体产生显著性C TLs反应;HLA-B*07不能有效呈递HPV16型E7抗原肽诱导机体产生显著性CTLs反应;E741-55及E751-65具有较强抗原性,初步筛选为HLA-A*02限制性CTL候选表位肽。

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中英文缩略词表

第1章 引言

第2章 材料与方法

2 .1 研究对象

2 .2 主要试剂

2 .3主要仪器

2 .4主要试剂的配制

2 .5 实验方法

2 .6 统计学方法

第3章 结果

3.1 RP-HPLC分析结果

3 .2 质谱鉴定结果

3 .3 E LS OPT检测结果

第4章 讨论

第5章 结论

第6章 不足与展望

致谢

参考文献

攻读学位期间的研究成果

综述