南昌地区输血HBV残余风险评估及献血者中HBV基因分型

摘要

目的:
　　探讨南昌地区献血者中酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)筛查策略的输血乙型肝炎病毒(Hepatitis BVirus,HBV)残余风险;并对献血者中HBV感染人群进行HBV基因分型情况调查,为该地区HBV分子流行病学提供研究数据。
　　方法:
　　1.采用HBsAg ELISA法(双抗体夹心法)对2012年1月1日至2012年12月31日献血者样本64400人份进行检测,筛查出HBsAg(+)的献血者;
　　2.采用实时荧光 PCR法( Real-Time PCR)对上述时间段 HBsAg(-)献血者进行HBV/HCV/HIV3项联合病毒核酸检测(Cobas TaqScreen MPX1.0试剂),检测模式为混检模式+拆分检测,即先进行6样本混样检测,再对混样检测阳性样本进行单样本拆分检测;对拆分检测阳性样本进行分项定量检测和乙肝两对半检测,评估HBV DNA(+)献血者感染状况及输血HBV感染残余风险;
　　3.采用分层随机抽样法分别抽取200人份HBsAg(+)样本和30人份HBV DNA(+)样本,其中HBsAg(+)样本先采用实时荧光定量PCR法进行HBV DNA定量检测,筛检出HBV DNA(+)样本,再采用核酸纯化柱提取法对抽取的HBV DNA(+)、HBsAg(+)和HBV DNA(+)、HBsAg(-)样本进行DNA提取,提取物进行HBV DNA S基因巢氏PCR扩增,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳判断产物分子量后,送测序公司进行测序和基因分型,确定其基因型,评价HBV基因分型情况。
　　结果:
　　1.HBsAg ELISA法共检测样本64400人份,检出HBsAg(+)样本862人份,HBsAg携带率与年龄、性别等因素呈一定相关性;
　　2.对63538人份HBsAg(-)样本进行HBV/HCV/HIV三项联检,共检出139人份病毒核酸检测阳性样本,139人份病毒核酸阳性样本进行分项定量检测,共检出HBV DNA(+)样本84人份,输血后HBV残余风险为0.13％,其病毒载量以<20 IU·mL-1为主(59人份,占70.2%);84人份HBV DNA(+)样本进行乙型肝炎两对半检测,发现乙型肝炎可疑窗口期感染6人份(占7.1%),隐匿性HBV感染63人份(占75.0%),其他(HBsAg+)15人份(17.9%);相关因素分析提示高年龄组男性献血者具有更高的输血HBV残余风险,建立固定献血者队伍对降低输血HBV残余风险作用不明显;
　　3.200份 HBsAg(+)样本中共检出 HBV DNA样本118份(59.0%),HBV DNA检出率与HBsAg ELISA法S/CO值呈正相关性;148人份样本进行DNA提取和S基因巢氏PCR扩增,经3%琼脂糖凝胶进行产物分子量鉴定,72人份样本测序要求,占48.6%;72人份样本送基因公司测序,检出B基因型为47人份(65.3%),C基因型为19人份(26.4%),6例未检出基因型(8.3%)。
　　结论:
　　1.ELISA法检测HBsAg(-)献血者的输血后HBV感染残余风险依然存在,其感染状况多以低病毒载量的隐匿性HBV感染为主,采用核酸检测技术对献血者进行血液常规筛查,可降低输血HBV残余风险,提高输血安全;
　　2.南昌地区献血者中HBV感染人群的HBV基因型以B型为主,C型次之,未见其它基因型。

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第1章 前言

第2章 HBsAg（-）献血者输血HBV残余风险分析

2.1 实验材料

2.1.1 主要材料

2.1.2 主要试剂

2.1.3 主要仪器

2.2 实验方法

2.2.1 献血者血液样本的收集、处理与保存

2.2.2 筛检献血者中的HBsAg（+）样本

2.2.3 筛检HBsAg(-)献血者中的HBV DNA(+)样本

2.2.5 统计学处理

2.3 结果

2.3.1 献血者样本HBsAg ELISA法检测结果

2.3.2 献血者HBsAg ELISA法的输血残余风险

2.3.3 NAT（+）样本乙肝两对半检测及感染状况分析

2.4 讨论

2.4.1 献血者中HBsAg(+)样本检出率及相关性分析

2.4.2 HBsAg(-)献血者输血HBV感染残余风险

2.4.3 HBsAg（-）、NAT（+）献血者HBV感染状况分析

2.5 小结

第3章 献血者中乙型肝炎病毒基因分型

3.1 实验材料

3.1.1 主要材料

3.1.2 主要试剂

3.1.3 主要仪器

3.2 实验方法

3.2.1 基因分型样本抽样

3.2.2 HBsAg(+)样本HBV DNA 定量检测

3.2.4 样本HBV全S区基因巢氏PCR扩增及测序分型

3.3 结果

3.3.1 献血者中HBsAg(+)人群HBV DNA定量检测

3.3.2 献血者中HBV DNA（+）人群基因分型结果

3. 4 讨论

3.4.1 献血者中HBsAg与HBV DNA相关性分析

3.4.2 献血者中HBV感染人群基因分型情况

3.5 小结

第4章 结论与展望

4.1 结论

4.2 进一步工作的方向

致谢

参考文献

攻读学位期间的研究成果

综述