异甘草酸镁对急性肝衰竭小鼠FGL2凝血酶原酶和血小板活化因子表达的影响

摘要

目的：
　　探讨异甘草酸镁对急性肝衰竭小鼠 FGL2凝血酶原酶和血小板活化因子表达及微血栓形成的影响，进一步探讨异甘草酸镁的保肝机制，为异甘草酸镁的临床应用提供新的理论依据。
　　方法
　　1、清洁级常规喂养健康雄性KM小鼠50只，饲养1周后随机分为三组，分别为正常对照组，肝衰模型组，异甘草酸镁组，其中异甘草酸镁组又分为25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg剂量三个亚组，对照组和模型组各10只，异甘草酸镁组三个亚组各10只。
　　2、模型组和异甘草酸镁组按350mg/kg D-Galn联合30μg/kg LPS一次性注射进腹腔内诱导肝衰竭模型，造模前3天异甘草酸镁组三个亚组分别腹腔注射25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg异甘草酸镁注射液，每天一次，对照组和模型组分别注射等体积生理盐水。于造模8h后处死各组小鼠。
　　3、各组分别进行以下指标检测：1）常规病理切片、HE染色，光学显微镜下观察各组肝组织病理改变和微血栓情况。2）全自动生化分析仪检测丙氨酸基转移酶（ALT）、血清天冬氨酸转移酶（ALT）、总胆红素（TBil）的水平。3） Elisa法检测血清中血小板活化因子（PAF）的水平。4）免疫组织化学染色法检测FGL2凝血酶原酶的表达。5）RT-PCR法检测FGL2mRNA的表达。
　　4、应用SPSS19.0软件进行各组数据统计与分析，组间均数比较采用单因素方差分析。
　　结果：
　　1、正常对照组，模型组，异甘草酸镁组各亚组的肝组织病理改变有明显差异性，其中正常对照组肝小叶结构完整，肝索排列条理清晰，肝细胞未见明显变性和坏死。模型组肝正常组织结构消失，镜下可见大片细胞坏死，残余少许正常肝细胞，很多炎性细胞浸润于坏死区和汇管区，肝窦部充血、微血栓形成明显，符合急性肝衰竭病理改变，结合小鼠临床表现和肝功生化指标结果提示诱导肝衰竭成功，异甘草酸镁组可见部分肝细胞浸润、坏死和微血栓形成，细胞肿胀明显，严重程度和干预药物浓度呈负相关。
　　2、正常对照组血清中ALT、AST、TBiL基本正常，模型组血清ALT、AST含量最高，异甘草酸镁组各亚组血清中ALT、ALT和对照组比较均有不同程度升高，和干预药物浓度呈负相关，但比模型组低。TBiL各组间未见明显差异性，可能和黄疸滞后性有关。
　　3、正常对照组血清PAF浓度最低，模型组血清PAF浓度最高，异甘草酸镁组随着药物浓度的增加，血清PAF浓度逐渐下降，但各亚组浓度均高于对照组，低于模型组。
　　4、正常对照组肝血窦及微血管内皮细胞基本没有或少许FGL2凝血酶原酶表达，模型组可见FGL2凝血酶原酶棕黄色深染色表达，尤其集中在肝血窦和微血管附近内皮细胞高度表达，异甘草酸镁组随着剂量的增加，FGL2的表达逐渐减少，各亚组蛋白含量表达均高于对照组，低于模型组。
　　5、正常对照组FGL2mRNA表达量很少，模型组高表达，与对照组比较差异有统计学意义，异甘草酸镁组各亚组均检测到FGL2mRNA表达，与药物浓度呈负相关性，与模型组以及各亚组间比较差异均有统计学意义。
　　结论：
　　本实验成功诱导急性肝衰竭模型；急性肝衰竭小鼠肝脏中FGL2凝血酶原酶和血小板活化因子高表达，肝组织出现明显的微循环障碍；随着异甘草酸镁药物浓度的增加，可逐渐减轻急性肝衰竭小鼠FGL2凝血酶原酶和血小板活化因子的表达，降低凝血酶的激活及微血栓形成，改善急性肝衰竭的微循环障碍而达到保肝护肝作用。

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中英文缩略词表

第1章 前言

第2章 材料与方法

2.1 实验材料

2.2 实验方法

2.4数据处理与统计

第3章 结果

3.1 肝脏病理组织形态学观察结果

3.2 肝功能生化指标的变化与对比分析

3.3 各组PAF因子ELISA检测结果

3.4 免疫组化检测FGL2蛋白分布表达

3.5 RT-PCR检测FGL2mRNA的表达结果

3.6 FGL2和PAF组间相关性分析

第4章 讨论

4.1 急性肝衰竭微循环障碍发生的原因及机制

4.2 Fgl2凝血酶原酶与急性肝衰竭的微循环障碍的作用关系

4.3 血小板活化因子（PAF）与急性肝衰竭的微循环障碍的作用关系

4.4 各组间 Fgl2 凝血酶原酶和血小板活化因子（PAF）的相关性分析

4.5 异甘草酸镁的作用机制以及对急性肝衰竭小鼠中 Fgl2 凝血酶原酶和PAF表达关系的影响

第5章 结论与展望

5.1 结论

5.2 展望

致谢

参考文献

攻读学位期间的研究成果

综述: FGL2凝血酶原酶与肝衰竭微循环障碍作用机制探究