VitD受体介导植物雌激素调节骨代谢效应的细胞学和分子流行病学研究

摘要

目的：绝经后骨质疏松症(Postmenopausal osteoporosis，PMOP)是由于妇女在生理性绝经后体内雌激素水平急剧下降所致的骨代谢失衡。由于雌激素长期应用可能带来心血管、乳腺癌等风险，作为雌激素的安全替代物，植物雌激素防治绝经后骨质疏松正受到关注。有研究发现雌激素调节骨代谢效应可能由VitD受体所介导，但植物雌激素的骨代谢调节效应是否与维生素D受体（VDR）有关未见报道。本研究拟从细胞和流行病学角度初探植物雌激素调节骨代谢是否涉及VD R。
　　方法：用不同浓度的金雀异黄酮（Genistein,GEN）作用于MC3T3-E1细胞，采用MTT比色法检测细胞增殖率，观察VDR受体阻断剂ZK159222对GEN效应的影响。MC3T3-E1细胞中加入GEN后，采用Western blotting法检测VDR蛋白的表达情况，加入雌激素受体α阻断剂MPP,雌激素受体β阻断剂PHTPP后观察是否取消GEN调节VDR蛋白效应。对前期流行病学调查300例南昌市绝经后妇女血液样本提取DNA，观察各样本VDR基因ApaI和BsmI限制性片段长度多态性，结合膳食调查和骨密度检查结果进行分析。观察在不同VDR基因多态性时膳食中植物雌激素与骨密度的关联性。
　　结果：10-8M的GEN可促进 MC3T3-E1细胞增殖（p<0.05），该作用可被VDR阻断剂ZK159222所取消，10-8M的GEN可上调MC3T3-E1细胞VDR蛋白表达（p<0.05），MPP和PHTPP不能取消该效应。对VDR限制性酶切位点ApaI和BsmI基因型分析发现，不同基因型样本的各部位 BMD无显著差异(p>0.05)，且不同基因型样本膳食植物雌激素摄入量与各部位 BMD无明显关联(p>0.05)。
　　结论：⑴VDR可介导金雀异黄酮（GEN）促进MC3T3-E1细胞增殖效应。⑵GEN上调VDR蛋白表达不是由雌激素受体所介导。⑶南昌市绝经后妇女 VDR基因多态性与各部位骨密度无关，与膳食植物雌激素摄入的骨代谢效应无关。

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英文缩写及全文和中文对照表

第1章 引言

第2章 材料与方法

2.1 主要材料与试剂

2.2 实验主要仪器和设备

2.3 主要试剂的配制

2.4 实验方法

2.5 数据处理

2.6 前期研究基础

第3章 实验结果

3.1 Genistein对MC3T3-E1细胞的作用

3.2 样本基因多态性检查结果

3.3 VDR基因ApaI 和BsmI酶切位点的不同基因型与BMD及一般情况

3.4 VDR基因ApaI 和BsmI酶切位点的不同基因型及摄入不同量植物雌激素与BMD及一般情况

第4章 讨论

第5章 结论与展望

5.1 结论

5.2 下一步研究方向

致谢

参考文献

综述: 维生素D的活性与代谢性骨病