手术减压对大鼠脊髓撞击并压迫模型的神经细胞自噬与凋亡影响的实验研究

摘要

目的：
　　观察手术减压对大鼠脊髓撞击并压迫模型的脊髓组织细胞自噬与凋亡的影响，探讨手术减压促进脊髓功能恢复的机制。
　　方法：
　　清洁级Sprague-Dawley大鼠72只，体重250～300g，按随机数字表法分为持续压迫组（n＝24）、手术减压组（n＝24）、假手术组（n＝24）。采用Allen’s法＋自制压迫件置入椎管造成脊髓急性损伤合并椎管内占位，各组分别在造模后8h、24h、3d、7d取材。采用BBB评分法评估大鼠后肢运动功能变化，RTFQ-PCR检测样本Beclin-1mRNA和Bcl-2mRNA表达，免疫荧光法检测自噬相关蛋白LC3的表达，活性检测试剂盒测定半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3（Caspase-3）的活性。
　　结果：
　　1、BBB评分：持续压迫组和手术减压组SD大鼠脊髓损伤后3d始见下肢活动，两组比较无统计学差异；造模后7d手术减压组大鼠BBB评分高于持续压迫组(P<0.05)；假手术组大鼠BBB评分在术后8h、24h、3d、7d相互间比较无统计学差异。
　　2、荧光定量PCR结果
　　2.1在各个时间点，持续压迫组和手术减压组大鼠脊髓组织Beclin-1mRNA表达水平均较假手术组升高(P<0.05)，持续压迫组高于手术减压组(P<0.05)。
　　2.2损伤后24h、3d、7d，手术减压组大鼠脊髓组织Bcl-2mRNA表达水平高于持续压迫组(P<0.05)。
　　3、免疫荧光染色：荧光显微镜下观察到LC3在持续压迫组和手术减压组神经细胞中均有较高表达。在各对应时间点，手术减压组LC3阳性细胞计数低于持续压迫组(P<0.05)。
　　4、Caspase-3活性检测结果：手术减压组Casepase-3活性在损伤后8h、24h、3d、7d较持续压迫组均降低(P<0.05)。
　　结论：
　　1、脊髓损伤后，自噬在神经细胞中的表达升高，手术减压可以使脊髓损伤后细胞自噬的表达下降。
　　2、脊髓损伤后，凋亡在神经细胞中的表达增强，手术减压降低脊髓损伤后细胞凋亡的表达。
　　3、手术减压能够促进大鼠脊髓撞击并压迫模型神经功能恢复，可能与抑制细胞凋亡、降低细胞自噬表达有关。

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中英文缩略词表

第1章引言

第2章材料与方法

2.1 材料

2.1.1 实验手术器械

2.1.2 主要试剂

2.1.3 主要溶液的配制

2.1.4 实验仪器

2.2 方法

2.2.1 实验动物分组

2.2.2 动物模型的制作

2.2.3 术后处理

2.2.4 BBB评分

2.2.5 样本采集

2.2.6 RTFQ-PCR

2.2.7 免疫荧光染色

2.2.8 Caspase-3活性检测

2.3 数据分析

第3章结果

3.1大鼠后肢运动功能评分

3.2 Beclin-1 mRNA表达水平

3.3 Bcl-2 mRNA表达水平

3.4 LC3免疫荧光染色

3.5 Caspase-3活性检测

第4章 讨论

第5章 结论与展望

5.1 结论

5.2 展望

致谢

参考文献

附图

攻读学位期间的研究成果

综述: 创伤性脊髓损伤的病理机制研究进展