B、C基因型乙肝病毒在HEK-293T细胞中免疫炎症反应比较研究

摘要

目的：
　　通过观察比较B、C基因型乙肝病毒感染HEK-293T细胞后分泌细胞因子产生的免疫炎症反应差异，作为B和C基因型乙肝病毒和临床病情是否相关的参考，从而对乙肝基因型与临床相关性的发生机制作补充，为临床治疗提供方向。
　　方法：
　　随机选取2015年1月至2015年9月至南昌市第九医院门诊和住院就诊的慢性乙型肝炎患者（HBV-DNA均为阳性）的血清标本254例。性别、年龄不限。并排除其他合并的疾病，且未进行性抗病毒治疗。诊断符合2015年中华医学会肝病学分会，中华医学会感染病学分会联合制订的慢性乙型肝炎防治指南。采用多对型特异性引物巢式PCR法鉴定并筛选出血清标本中的B、C两种基因型，随机选取B、C基因型15例。分别扩增B、C基因型血清标本中HBV病毒的s和c基因片段。采用克隆技术构建含有s和c基因片段表达绿色荧光蛋白的重组真核表达质粒，转染至HEK-293T细胞中，检测该细胞中IL-1β、TNF-α等的细胞因子分泌的水平。分析各组间的临床特征、IL-1β、TNF-α水平的差异。采用SPSS20.0软件进行统计学分析。P＜0.05具有统计学意义。
　　结果：
　　转染B基因型的s片段细胞中IL-1β水平为（143.89±46.48）pg/ml、TNF-α水平为（7.97±1.03）pg/ml，c片段细胞中IL-1β水平为（253.62±65.12）pg/ml、TFN-α水平为（8.65±1.07）pg/ml；C基因型的s片段中IL-1β水平为（40.96±29.29）pg/ml，TNF-α水平为（4.22±0.56）pg/ml，c片段中IL-1β水平为（35.78±19.31）pg/ml，TNF-α水平为（3.39±0.33）pg/ml。
　　结论：
　　乙肝病毒B基因型中基因片段在体外HEK-293T中的免疫炎症介质表达量明显高于C基因型。这或许是一个与临床致病性不同有关的因素。能从某种程度上证实两种基因型在体外细胞免疫反应过程中的不同。这为我们提供了另一个慢性乙型肝炎的研究角度。

目录

声明

中英文缩略词表

第1章 前言

第2章 材料与方法

2.1研究对象

2.2标本采集

2.3试剂和仪器

2.4 PCR获取基因片段

2.5 细胞培养

2.6 细胞转染

2.7 免疫组化

2.8 双抗体ELISA法检测

2.9 统计方法

第3章 结果

3.1 HBV基因型分布构成

3.2 各细胞因子的分泌量

3. 3荧光显微镜下质粒转染后的图片

3.4 免疫组化所得到图片

第4章 讨 论

4.1 HBV基因型分布

4.2 乙肝病毒B、C基因型与慢性乙型肝炎的关系

第5章 结论

致谢

参考文献

综述:慢性乙型病毒性肝炎免疫学发病机制研究进展