鹅胰岛素样生长因子-I（IGF-I）基因克隆测序及多态性研究

摘要

本实验以扬州鹅为素材，对鹅胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)基因组部分序列进行了克隆、测序，并用PCR-SSCP的方法对其多态性进行了检测。主要结果如下： 1.得到了鹅IGF-Ⅰ基因的5'调控区、外显子l、4及内含子1、3的全部或部分序列，所测序得到的内含子1、内含子3和外显子4序列已上传至Genbank，序列号分别为EU07203l、EU111743。本研究首次得到了鹅IGF-Ⅰ基因的内含子1和3序列。序列比对发现，鹅IGF-Ⅰ基因与鸡、鸭同源性较高，无论是外显子还是内含子都大于80％(除内含子3)，外显子1与鸡、鹌鹑、火鸡、鸭、鸵鸟、鹅等禽类同源性在98％以上，与梅花鹿、山羊、猪、牛、北极狐、绵羊、小鼠和人等哺乳动物同源性在89％～94％之间，与乌颊鱼、罗非鱼的同源性在60％～65％之间。对鹅5'调控区和外显子1序列进行转录因子结合位点和启动子区域预测，发现有多个结合位点和一个启动子区域。进化分析表明IGF-Ⅰ基因的进化与物种进化相一致，反映了IGF-Ⅰ基因在进化中的保守性及生理功能的重要性。 2.根据鹅IGF-Ⅰ基因的5'调控区、外显子1和内含子1部分序列设计了7对引物，用PCR-SSCP的方法对其进行单核苷酸多态性(SNP)检测。结果未发现多态性。

目录

声明

前言

第一章文献综述

1 DNA分子标记技术的研究进展

1.1限制性片段长度多态性(restriction fragment length length polymorphism,RFLP)

1.2 DNA指纹(DNA fingerprinting,DFP)

1.3随机扩增多态性(random amplified polymorphic DNA,RAPD)

1.4扩增片段长度多态性(amplified fragment length polymorphism,AFLP)

1.5单链构象多态性(single strand conformation polymorphism,SSCP)

2 IGF-Ⅰ及其基因的研究进展

2.1GF-Ⅰ的发现

2.2IGF-Ⅰ的生物学功能

2.3 IGF-Ⅰ基因的研究进展

3本研究目的、意义

参考文献

第二章鹅IGF-Ⅰ基因的克隆与序列分析

1实验目的

2材料与方法

2.1试验动物

2.2主要仪器设备与试剂

2.3分析工具软件

2.4鹅血红细胞基因组DNA的小量提取

2.5引物设计与合成

2.6 PCR扩增

2.7 PCR产物检测

2.8 PCR扩增产物的克隆与测序

2.9序列的Genbank登录

3结果与分析

3.1基因组DNA提取结果

3.2 PCR扩增与测序

3.3序列分析

4讨论

4.1试验材料的选择

4.2长链PCR

4.3测序方式

4.4内含子的扩增

4.5序列分析

参考文献

第三章鹅IGF-Ⅰ基因的PCR-SSCP分析

1实验目的

2材料与方法

2.1试验动物

2.2主要仪器设备与试剂

2.3分析工具软件

2.4鹅血红细胞基因组DNA的小量提取

2.5引物设计与合成

2.6 PCR扩增

2.7 PCR产物检测

2.8 SSCP分析

3结果与分析

3.1 PCR扩增

3.2 SSCP检验

4讨论

4.1影响PCR-SSCP检测的因素

4.2家禽IGF-Ⅰ基因的多态性

4.3 IGF-Ⅰ基因的多态性检测方法

4.4IGF-Ⅰ基因的多态性与生产性能的关系

参考文献

结论

附录

致谢

攻读学位期间发表的学术论文及序列目录