空肠弯曲菌致GBS动物模型的建立及模式动物体内与GBS相关基因的挖掘

摘要

空肠弯曲菌Campylobacterjejuni(CJ)，是人类肠胃炎的最主要的致病菌，临床约90％的急性细菌肠炎均与该菌相关。在欧美等国，其致病率已超过沙门氏菌、志贺氏菌、O157大肠杆菌等。CJ除了引起肠炎之外它还是是吉兰-巴雷综合征Guillain-Barresyndrome(GBS)的主要诱因之一，有报道指出，在CJ感染之后人类GBS的发病率会提升100倍。GBS又称急性炎症性脱髓鞘性多发性神经病(AIDP)，是神经系统由体液和细胞共同介导的单向性自身免疫性周围神经病，死亡率约5～10％。鉴于CJ极高的感染率以及后续的潜在威胁，已受到人们的密切关注。本研究利用巴马小型猪构建空肠弯曲菌诱导GBS的动物模型，挖掘GBS模式动物中与病发相关的基因。
　　 1、空肠弯曲菌致GBS动物模型的建立
　　 选取致人GBS源空肠弯曲菌株，采用3×1012cfu/ml、3×1011cfu/ml、3×1010cfu/ml、3×109cfu/ml等浓度对4组巴马小型猪灌胃攻毒，每头猪攻毒10ml，同时设立对照组。从第二周开始定期采集组织样及血液样本，通过免疫学检测及组织病理切片判定病变情况。免疫学检测发现，在16份攻毒组样品中有12份血清中GM1-IgG抗体为检测阳性，阳性检出率为81.25％。但是，并没有显著的攻毒浓度梯度差异。病理组织切片H/E染色显示，抗体阳性试验猪的大脑出现了噬神经元、小血管周围间隙增宽、神经中央染色溶解等现象;切片LFB染色显示，在发病模型动物的小脑白质和腰膨大出现了轻度脱髓鞘现象。结果表明空肠弯曲菌诱导GBS的浓度在3×109cfu/ml～3×1012cfu/ml均可，组织样本及血液采集在攻毒后4～5周较理想。
　　 2、空肠弯曲菌致GBS病发时宿主体内相关基因的研究
　　 根据病理组织切片和免疫学检测结果，选取典型发病样本和对照组样本的神经组织。通过猪全基因组表达谱芯片检测得到差异探针2156个(P＜0.05)，其中上调差异探针896条，下调差异探针1260条，这些探针涉及到的基因共222个，其中上调基因114个，下调基因108个。基于GeneOntology数据库对222个差异基因进行分析，得到显著基因功能(GO)130个(P＜0.05)，其中上调基因显著性GO55个，下调基因显著性GO75个;基于KEGG数据库，分析所有差异基因参与的信号通路(Pathway)，得到相关Pathway共127项，其中上调基因相关的显著性Pathway30项，下调基因相关的显著性Pathway37项;采用显著性GO内所含的基因与显著性Pathway所含的基因，对二者取交集，使用交集内的基因分别构建病变组和对照组的共表达网络，最终得到21个关键基因。其中HPRT1、PKC和PPARGC-1等处于网络图的核心位置，PPARGC-1、SUS2DD、AMPKA2等11个关键基因在病发时都表现出显著性被抑制的状态。

目录

符号说明

综述 空肠弯曲菌概述

1 基本特性

2 流行病学

3 临床症状

4 空肠弯曲菌与食品

5 抵抗力和毒素(受外界理化因素的影响)

6 检验方法

7 预防和控制

第一章 空肠弯曲菌致GBS动物模型的建立

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

第二章 空肠弯曲菌致GBS病发时宿主体内相关基因的研究

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

参考文献

全文小结

附表

致谢

攻读硕士期间发表论文情况

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