自噬在紫草素诱导人A375黑素瘤细胞凋亡中的作用

摘要

目的: 1、检测紫草素及自噬抑制剂3-MA预处理后紫草素在体外对人A375黑素瘤细胞增殖影响 2、研究紫草素诱导人A375黑素瘤细胞自噬产生以及通过应用3-MA抑制自噬后探讨自噬在紫草素诱导人A375黑素瘤细胞凋亡中的作用。 方法: 1、 WST-1法检测紫草素及自噬抑制剂3-MA预处理后紫草素对人A375黑素瘤细胞增殖的影响 2、形态学观察紫草素联合3-MA对人A375黑素瘤细胞生长的影响 3、 Western blot法检测紫草素联合3-MA对人A375黑素瘤细胞自噬相关蛋白Beclin1和LC3B及凋亡相关蛋白Caspase-3表达的影响 结果: 1、增殖试验结果显示，不同浓度(0.1μg/ml、0.25μg/ml、0.5μg/ml、1.0μg/ml、1.5μg/ml、2.0μg/ml、2.5μg/ml)的紫草素均对A375细胞均产生了抑制作用，抑制作用呈现出时间和浓度的依赖性。3-MA抑制自噬后，紫草素对A375细胞生长抑制率增加。 2、倒置相差显微镜下观察，与未处理组相比，紫草素组以及紫草素+3-MA组的A375肿瘤细胞培养基液面细胞碎片增多，细胞数目减少、萎缩变圆，发生明显凋亡，并且紫草素+3-MA组凋亡比紫草素组凋亡更加明显。 3、 Western blot检测自噬相关蛋白显示，与对照组相比，紫草素组自噬相关蛋白的表达明显升高，表明紫草素诱导A375细胞自噬产生。 4、 Western blot检测结果显示，抑制自噬可促进紫草素诱导的A375细胞凋亡相关蛋白Caspase-3的表达。 结论: 紫草素可诱导人A375黑素瘤细胞产生自噬;紫草素和3-MA联合用药可增加人A375黑素瘤细胞凋亡。紫草素诱导人A375黑素瘤细胞凋亡的过程中自噬起到保护作用，3-MA特异性抑制自噬后可增强紫草素诱导的人A375黑素瘤细胞的凋亡。本研究为今后以自噬为切入点，通过调控自噬来改善抗肿瘤药物的疗效提供了新的思路。

目录

摘要

缩略词表

前言

1 实验材料

1．1 细胞株

1．2 主要仪器和设备

1．3 主要试剂及材料

1．4 主要试剂配置

2 实验方法

2．1 细胞培养

2．2 WST-1法检测紫草素对人A375黑素瘤细胞增殖的影响

2．3 WST-1法检测紫草素联合3-MA对人A375黑素瘤细胞增殖的影响

2．4 统计学处理

2．5 形态学观察紫草素联合3-MA对人A375黑素瘤细胞生长的影响

2．6 Western blot法检测紫草素对人A375黑素瘤细胞白噬相关蛋白Beclin1和LC3B表达的影响

3 实验结果

3．1 不同浓度紫草素对人A375黑素瘤细胞增殖的影响

3．2 WST-1法检测紫草素联合3-MA对人A375黑素瘤细胞增殖的影响

3．3 形态学观察紫草素联合3-MA对人A375黑素瘤细胞生长的影响

3．4 Western blot法检测紫草素对人A375黑素瘤细胞自噬相关蛋白Beclin1和LC3B表达的影响

3．5 Western blot法检测紫草素联合自噬抑制剂3-MA对人A375黑素瘤细胞自噬相关蛋白Beclin1和LC3B及凋亡相关蛋白Caspase-3表达的影响

4 讨论

参考文献

综述 自噬在相关皮肤病中的研究进展

致谢

攻读学位期间完成的学术论文题目

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