富硒女贞子缓解奶牛热应激效果的研究

摘要

热应激是一种主要由高温高湿引起的全身适应性综合征，中兽医病因病理及辩证诊治的基础理论认为，热应激是由于高热邪气所致的阳盛阴虚病症，女贞子是木犀科植物女贞的果实，具有清虚热，补肝益肾的功效。本课题组前期研究结果显示通过生物富集硒的女贞子能有效降低急性热应激小鼠的死亡率，缓解热应激造成的小鼠肝损伤。可以有效的提高热应激奶山羊的免疫力，缓解热应激奶山羊产奶量的下降问题，并研究了富硒女贞子三种有效成分对奶山羊外周血淋巴细胞增殖活性、细胞因子分泌的影响。因此，我们对富硒女贞子进行了抗奶牛热应激的研究，通过富硒女贞子对奶牛的抗热应激疗效试验，观察其对奶牛生产性能、血液学和血清生化指标的影响及提取富硒女贞子蛋白观察其对奶牛外周血淋巴细胞增殖活性和细胞因子分泌的影响。在前人的基础上进行富硒女贞子抗奶牛热应激的效果、作用机制及其有效部位群的探讨。
　　试验一富硒女贞子对热应激奶牛的影响
　　为了探索富硒女贞子对奶牛热应激的干预作用，本试验在2014年7月21日到9月1日期间，选用50头年龄、胎次、产奶量相近的中国荷斯坦奶牛随机分为5组，其中HS组、MS组和LS组分别按照每天60g/头、40g/头、20g/头剂量的富硒女贞子拌饲，P组按每天40g/头普通女贞子拌饲，C组为热应激对照组常规饲养。通过试验期间每旬前3天下午15时1次/天给药，来观察富硒女贞子对热应激奶牛生产性能、血液学和血清生化指标的影响。结果显示:用药后，MS组的ACTH水平和皮质醇水平显著下降(P＜0.05)，T3恢复到正常水平。HS组、MS组的HSP70水平显著升高(P＜0.05)，MS组和P组的SOD和GSH-PX水平显著提高(P＜0.05)。HS组MS组和P组的IFN-γ水平显著提高(P＜0.05)，其中MS组差异极显著(P＜0.01)。富硒女贞子3个组的奶产量较热应激前（5月1日到6月15日）分别下降了23.91％、28.87％、25.23％，与P组和C组分别下降的39.19％和36.55％有显著差异(P＜0.05); MS组和P组的乳蛋白含量较热应激前也有显著提高(P＜0.05)。表明富硒女贞子可以有效的改善热应激期间奶牛的内分泌、抗氧化能力、免疫能力，促进HSP70分泌，从而在生产性能方面，富硒女贞子可以有效的缓解热应激期间奶牛产奶量的下降，并提高乳品质。
　　试验二富硒女贞子蛋白对奶牛外周血淋巴细胞增殖活性、细胞因子分泌的影响
　　通过提取富硒女贞子蛋白和普通女贞子蛋白，并使用制备液相色谱从粗提的富硒女贞子蛋白中提取硒蛋白馏分(SLLPF)，采用MTT和ELISA法检测这三种蛋白质对奶牛外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocyte; PBL)增殖活性和多种细胞因子分泌功能的影响，来探索富硒女贞子抗奶牛热应激的有效成分或/和有效部位群。试验结果表明，三种蛋白均可促进ConA刺激下的奶牛外周血淋巴细胞增殖，效果随浓度的增加而上升，富硒女贞子蛋白与硒蛋白馏分在浓度高于50μg/ml时较对照组效果显著(P＜0.05)，在浓度高于400μg/ml时，普通女贞子蛋白较对照组差异显著(P＜0.05)，富硒女贞子蛋白和硒蛋白馏分较对照组差异极显著(P＜0.01)，且富硒女贞子蛋白在各个浓度均优于普通女贞子蛋白，差异显著(P＜0.05)。富硒女贞子蛋白组和SLLPF组的的IL-2、IL4、IL-6、IFN-γ水平均显著高于对照组(P＜0.05)，其中富硒女贞子蛋白的IL-4和SLLPF组的IL-6水平较对照组有极显著上升(P＜0.01)，普通女贞子蛋白的IL-4和IFN-γ较对照组也有显著提高(P＜0.05)。说明富硒女贞子蛋白可以进一步提高奶牛外周血淋巴细胞细胞活性，并调升细胞因子的分泌。同时提示富硒女贞子蛋白中的硒蛋白可能是富硒女贞子的有效部位群之一。
　　结论:富硒女贞子按每头每天20g～60g的剂量拌料饲喂可以有效的缓解奶牛热应激导致的产奶量下降，以每头每天40g的作用效果为佳，并且作用效果优于普通女贞子。其作用机制是通过HPA轴来调节与热应激相关的ACTH、COR等激素，提高热应激期间奶牛的免疫力，增强抗氧化活性，调节HSP70等热应激休克蛋白表达来实现的。其中富硒女贞子中的硒蛋白可能是富硒女贞子的主要作用有效成分，体外实验证实可有效促进奶牛外周血淋巴细胞的增殖，调升IL-2、IL-4、IL-6和IFN-γ的分泌水平。

目录

摘要

符号说明

第一部分 文献综述

1．热应激的发生机制及对奶牛的影响

1．1 热应激的发生机制

1．2 热应激反应对奶牛的影响

2．中药防治奶牛热应激的效果和机制(研究进展)

2．1 中药防治热应激现状

2．2 中药防治奶牛热应激机制

3．微量元素硒的抗应激的研究进展

3．1 动物体内硒的分布、吸收与代谢

3．2 硒在体内的存在形式及抗应激机理

参考文献

第二部分 试验研究

试验一 富硒女贞子对热应激奶牛的影响

1．材料和方法

2．试验结果与分析

3 分析与讨论

4 小结

参考文献

试验二 富硒女贞子蛋白对奶牛外周血淋巴细胞增殖活性、细胞因子分泌的影响

1．材料与方法

2．结果与分析

3．讨论

4．小结

参考文献

全文结论

攻读学位期间发表的学术论文

致谢

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