湿地植物提取物对病原菌的抑制作用

摘要

抗生素的发现和使用是人类在医药领域取得的伟大成就之一，它对人类健康和生命安全起到了极其重要的保障作用，也对养殖业的健康发展起到了积极的推动作用。但近年来养殖业在抗生素使用过程中对其用量、用药次数、停药期的忽视导致农副产品中药物残留等问题日益突出。而人类因直接使用抗生素或摄入食物中残留的抗生素，导致抗生素在其体内富集引起毒理效应、导致病源菌产生耐药性使药效降低等问题也日趋严重。为了解决抗生素带来的这些问题，寻找新的、天然的、能够替代抗生素控制传染性疾病的药物成为当务之急。湿地植物由于其生活环境的特殊性，在抵抗病原微生物等方面可能具有独特的作用，因此本研究选用湿地植物芦苇(Phragmites australias)、空心莲子草(AlternantheraPhiloxeroides)、凤眼蓝（Eichhornia crassipes）、荷（Nelumbo nucifera）、菱（Trapa bispinosa）、苦草（Vallisneria natans）、芡实（Euryale ferox）、辣蓼（Polygonum hydropiper）、酸模叶蓼(P.lapathifolium)、愉悦蓼(P.jucundum)、菖蒲(Acorus calamus)、菹草(Potamogetoncrispus)、马来眼子菜（P.malaianus）、槐叶苹（Salvinia natans）、金鱼藻（Ceratophyllumdemersum）、鸭舌草(Monochoria vaginalis)、黑藻（Hydrill verticillat）、水鳖（Hydrocharisdubia）、水芹（Oenanthe javanica）、芙蓉莲（Pisitia stratiotes）、蒲公英（Taraxacummongolicum）、鸭跖草（Commelina communis)、龙葵（Solanum nigrum）、金钱草(Lysimachiachristinae)、茜草（Rubia cordifolia）、繁缕(Stellaria media)、黄花酢浆草（Oxalispescaprae）、茭白（Zizania latifolia）、马齿苋(Portulaca oleracea)、扬子毛茛（Ranunculus sieboldii水蜈蚣（Kyllinga brevifolia）、牛筋草(Eleusine indica)、活血丹（Glechoma longituba）、节节草（Equisetum ramosissimum）、绶草(Spiranthes sinensis)、看麦娘(Alopecurus aequalis)共36种植物，采用水提取、乙醇提取法提取有效成分，确定它们对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大肠杆菌（Escherichia coli）、铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa）、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)、嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)、温和气单胞菌(Aeromonas aeruginosa)、副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）7种细菌的抑菌活性，并从中筛选具有较强抑菌作用的植物提取物，进一步采用不同的溶剂萃取分离，选出抑菌能力最强的萃取物，将其添加至克氏原螯虾（Procambarus clarkii）饲料中，观察萃取物对克氏原螯虾存活率及非特异性免疫力的影响，为开发有效控制细菌性疾病的植物药物以及天然的植物饲料添加剂提供资料。主要研究结果如下:
　　1.菱、芡实、辣蓼、龙葵、茜草、绶草、扬子毛茛7种植物的乙醇提取物对大肠杆菌有一定的抑制作用;菱、芡实、辣蓼、芙蓉莲、龙葵、茜草、绶草、扬子毛茛8种植物的乙醇提取物对金黄色葡萄球菌有一定的抑制作用;菱、芡实、龙葵、茜草4种植物的乙醇提取物对沙门氏菌有一定的抑制作用;菱、芡实、辣蓼、龙葵、茜草、扬子毛茛6种植物的乙醇提取物对铜绿假单胞菌有一定的抑制作用;空心莲子草、菱、鸭舌草、龙葵、茜草、马齿苋、绶草、扬子毛茛、活血丹、金鱼藻、芙蓉莲、金钱草12种植物的乙醇提取物对嗜水气单胞菌有抑制作用;空心莲子草、菱、龙葵、茜草、绶草、金钱草、活血丹、马齿苋、扬子毛茛、辣蓼10种植物的乙醇提取物对温和气单胞菌有一定的抑菌作用;空心莲子草、菱、龙葵、茜草、马齿苋、扬子毛茛、活血丹、金钱草8种植物的乙醇提取物对副溶血弧菌有抑菌作用。
　　2.植物水提物的抑菌作用明显小于植物醇提物的抑菌作用。绶草水提物浓度在浓度200 mg/mL时对大肠杆菌有抑菌作用，其抑菌圈直径为12.38 mm;空心莲子草、芡实、龙葵、绶草、繁缕、蒲公英6种植物的水提物对嗜水气单胞菌有抑菌作用;空心莲子草、鸭舌草、绶草、龙葵、蒲公英、繁缕、活血丹7种植物的水提物对温和气单胞菌有抑菌作用;空心莲子草、菱、绶草、龙葵、繁缕、活血丹6种植物的水提物对副溶血弧菌有抑菌作用。
　　3.菱、茜草、芡实、龙葵4种植物的乙醇提取物均对7种细菌具有较好的抑菌性，将其醇提物采用不同溶剂进行萃取，发现菱乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物的抑菌效果明显，在其浓度为200 mg/mL时对金黄色葡萄球菌的抑菌直径为26.38 mm，对副溶血弧菌的抑菌直径为27mm，而1.00％氯霉素对金黄色葡萄球菌的抑菌直径为25.73 mm，对副溶血弧菌的抑菌直径为25.25 mm，菱乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物的抑菌效果明显高于1.00％氯霉素的抑菌效果。
　　4.对克氏原螯虾饲喂不同添加剂的饲料15天后，菱乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物组动物的血清总蛋白的含量、血清碱性磷酸酶和酸性磷酸酶的活性显著高于对照组动物和1.00％氯霉素组动物。菱乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物作为饲料添加剂可以明显提高克氏原螯虾的存活率。
　　以上结果说明，不同提取方法获得的有效成分对各类细菌的抑菌作用表现出异质性，醇提物的抑菌性能要高于水提物的抑菌性;菱、芡实、辣蓼、水芙蓉、龙葵、茜草、绶草、扬子毛茛、空心莲子草、鸭舌草、马齿苋、活血丹、金鱼藻、蒲公英、繁缕、金钱草16种植物的醇提物对7种菌有不同程度的抑菌效果;菱乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物对7种菌都有显著的抑菌活性，它可提高动物血清中总蛋白的含量、血清碱性磷酸酶和酸性磷酸酶的活性，作为饲料添加剂也可明显提高克氏原螯虾的存活率。

目录

摘要

1 文献综述

1．1 细菌性疾病的危害

1．2 植物提取物应用于疾病的防治及对水生动物的免疫机制

1．2．1 植物提取物对疾病的防治

1．2．2 植物提取物对水生动物的免疫机制

2 本项目研究的目的与意义

3 材料与方法

3．1 实验材料

3．1．1 供试植物

3．1．2 供试菌株

3．1．3 实验动物

3．1．4 实验仪器

3．1．5 实验试剂及其配制

3．2 实验方法

3．2．1 植物提取物及萃取物的制备

3．2．2 植物提取物抑菌活性的测定

3．2．3 萃取物对克氏原螯虾非特异免疫能力影响的测定

3．2．4 萃取物对克氏原螫虾死亡率影响的测定

3．3 数据统计与分析

4 结果

4．1 植物提取物对动物致病菌的抑菌活性

4．1．1 植物提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌活性

4．1．2 植物提取物对大肠杆菌的抑菌活性

4．1．3 植物提取物对鼠伤寒沙门氏菌的抑菌活性

4．1．4 植物提取物对铜绿假单胞菌的抑菌活性

4．1．5 植物提取物对嗜水气单胞菌的抑菌活性

4．1．6 植物提取物对温和气单胞菌的抑菌活性

4．1．7 植物提取物对副溶血弧菌的抑菌活性

4．2 植物萃取物对动物致病菌的抑菌活性

4．2．1 植物萃取物对金黄色葡萄球菌的抑菌活性

4．2．2 植物萃取物对大肠杆菌的抑菌活性

4．2．3 植物萃取物对铜绿假单胞菌的抑菌活性

4．2．4 植物萃取物对副溶血弧菌的抑菌活性

4．2．5 植物萃取物对温和气单胞菌的抑菌活性

4．2．6 植物萃取物对嗜水气单胞菌的抑菌活性

4．3 菱乙醇提取物、乙酸乙酯萃取物对克氏原螯虾非特异性免疫的影响

4．4 植物萃取物对克氏原螯虾存活率的影响

5 讨论

5．1 植物提取物对动物致病菌的抑菌作用

5．2 菱乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物对克氏原螯虾免疫力的影响

6 结论

参考文献

致谢

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