马来酸氟吡汀缓释固体分散体口服经时特征及药效学研究

摘要

马来酸氟吡汀(FM)是非阿片类镇痛药，作用于中枢神经系统，目前临床治疗效果明确，主要用于治疗各种急慢性疼痛，包括由于肌肉紧张增高引起的疼痛、关节疾病导致的疼痛、紧张型头痛、癌痛、痛经、骨伤科、外科手术后或运动损伤后疼痛等。FM的不良反应少且一般不严重，最常见的不良反应是疲倦，其他还有眩晕、口干、嗜睡。长期服用不产生耐受性和依赖性，而且副反应症状与剂量有关，当停止服药一段时间后，由副反应表现出来的症状会逐渐减轻直至消失。目前FM的市售剂型为普通型胶囊剂，口服剂型，每日3-4次，每次用量100mg，每日最大剂量600mg，目前国内作为进口药，暂时还没有其他剂型上市。查阅文献，有制备FM口服固体速释剂型、FM缓释片，并考察其相关制剂在动物体内的药动学指标，暂无其他相关剂型的研究。
　　FM现有剂型少，难以满足临床用药需求，故需要开发出安全高效的FM新剂型。在成功制备FMSSD的基础上，本实验建立生物样品中FM的HPLC测定方法，在灌胃给予FMSSD后，对大鼠血浆经时浓度和小鼠各组织中浓度以及药效考察，了解FMSSD在大鼠体内的药动学特征及小鼠体内组织分布情况，为研究FM新剂型提供基础实验依据。主要研究内容和结果如下:
　　1.建立生物样品中FM的HPLC检测方法
　　色谱条件:色谱柱:Symmetry C18（5μm，4.6×250mm）;流动相:甲醇∶水=50∶50(V/V)，用1mol/L的甲酸调pH值至6.70;柱温:25℃;流速:0.5ml/min;检测波长:320nm;进样量:20μl。FM在大鼠血浆中0.015～5.00μg/ml浓度范围内，在小鼠心、肝、脾、肺、肾、脑各组织中0.064～21.33μg/g浓度范围内均呈现良好的线性关系(R2＞0.9991)。该方法具有良好的专属性、精密度RSD均小于6％、稳定性RSD均小于6％、回收率大于90％，均符合相关检测要求，可用于生物样品中FM的测定。
　　2.FMSSD药动学及组织分布研究
　　采用大鼠血药浓度测定法研究FMSSD在大鼠体内的药动学特征，以三个剂量(9mg/kg、27mg/kg、54mg/kg)大鼠灌胃给药后，采用二室模型对数据进行处理，确定药动学参数。三组剂量血药浓度的达峰时间分别为（3.318±0.308）、（3.326±0.548）、（3.333±0.516）h;达峰时FM的血药浓度依次为（0.740±0.031）、（1.825±0.083）、（4.014±0.183）μg/ml;大鼠血浆中药物吸收半衰期t1/2kα分别为（0.837±0.364）、（0.835±0.055）、(0.831±0.057)h;分布半衰期t1/2α分别为（4.463±1.984）、（4.477±2.186）、（4.474±2.429）h;消除半衰期t1/2β分别为（6.417±3.155）、（6.333±0.326）、（6.332±0.329）h;消除率CL/F分别为（1.004±0.034）、（1.202±0.035）、（1.546±0.017）L/h/kg;时间-血药浓度曲线下面积AUC0-24分别为（8.244±0.198）、（21.624±0.453）、（45.134±0.803）μg·h/ml。
　　小鼠按78mg/kg灌胃给予FMSSD后，HPLC测定2、4、8、12、24h小鼠各组织(心、肝、脾、肺、肾、脑）中FM浓度，比较药物在小鼠各组织中的分布量;同时利用FM具有荧光特性，对同等剂量灌胃给药后的小鼠组织进行冰冻切片，将切片置于荧光显微镜下观察，统计出FM在组织中的大体分布趋势，其结果与用HPLC测定FMSSD在各组织中分布的定量分析结果一致。给药后各组织各时间点药物分布有显著差异，各组织药物分布量随时间变化而变化，在4h时达最大值，FM在各组织分布量:肝＞脑＞肾＞心＞脾＞肺。
　　3.自制FMSSD与市售胶囊剂的生物等效性研究
　　对自制FMSSD及市售胶囊剂进行生物等效性评价，分别对主要药动学参数Cmax、TmaxAUC0-t、AUC0-∞采用方差分析、双单侧t检验及(1-2α)％置信区间的方法进行生物等效性统计学分析，结果表明两种FM不同剂型间存在着显著性差异(P＜0.01)。以AUC0-∞计算的相对生物利用度F为（144.388±18.400）％，在参比制剂的80.0％～125.0％范围外，说明两种制剂在大鼠体内不具有生物等效性，自制FMSSD与胶囊剂相比，具有缓慢释放、缓速分布与消除的特点。
　　4.FMSSD的药效学研究
　　小鼠分别灌胃给予生理盐水阴性对照、低中高(13mg/kg、39mg/kg、78 mg/kg)剂量的FMSSD、(78mg/kg)剂量的市售胶囊，采用小鼠热板法、醋酸扭体法考察各组药物镇痛效果。结果显示各给药组均能提高小鼠痛阈值、减少由醋酸导致的小鼠疼痛扭体反应次数，与生理盐水对照组比较具有显著性差异(P＜0.05)。在给药后0.5～2h内，高剂量FMSSD组的小鼠痛阈提高率(36.14％～61.47％)、扭体抑制率(19.71％～49.97％)都低于市售胶囊组(45.85％～85.53％)、(28.82％～72.16％)，但是高剂量FMSSD组在给药4h后小鼠痛阈提高率(95.38％)、扭体抑制率(81.64％)达最大值，市售胶囊组在给药2h后小鼠痛阈提高率(85.53％)、扭体抑制率(72.16％)达最大值。同时给药4～24h后，高剂量FMSSD组的小鼠痛阈提高率维持在(12.23％～95.38％)、扭体抑制率维持在(15.42％～81.64％);市售胶囊组的小鼠痛阈提高率维持在(1.02％～48.47％)、扭体抑制率维持在(9.84％～68.77％)。综合分析两种镇痛模型，表明在相同给药剂量下， FM市售胶囊在给药2h前迅速发挥药效，高于FMSSD，但是在2h达到最大药效后其镇痛效果下降速度快，各FMSSD组镇痛效果下降平缓，体现了缓释镇痛的优越性。同时FMSSD随着给药剂量的增加，小鼠痛阈提高率、扭体抑制率也逐渐增加，说明FMSSD的镇痛效果与剂量成正比，剂量越大，镇痛效果越明显。

目录

摘要

符号说明

第一章 综述

1 FM研究现状

1．1 化学名称和结构式

1．2 FM药理作用

1．3 FM临床应用

1．4 FM药代动力学特征

2 FM剂型研究

2．1 FM口服固体速释剂型

2．2 FM胶囊

2．3 FM缓释片

3 缓释固体分散体研究现状

3．1 缓释固体分散体剂型的特点及优势

3．2 缓释固体分散体的问题及展望

4 本文的立题依据及主要研究内容

第二章 生物样品中FM的HPLC测定方法

1 仪器与材料

1．1 仪器

1．2 试剂

1．3 动物

2 色谱条件

3 实验方法与结果

3．1 对照品溶液配制

3．2 空白生物样品的采集

3．3 生物样品的处理

3．4 方法学评价

4 讨论

4．1 最大吸收波长的确定

4．2 色谱条件的选择

4．3 去蛋白试剂的选择

5 小结

第三章 FMSSD药动学及组织分布研究

1 仪器与材料

1．1 仪器

1．2 试剂

1．3 动物

2 实验方法

2．1 色谱条件

2．2 大鼠体内药动学研究

2．3 小鼠体内组织分布研究

2．4 数据的处理

3 实验结果

3．1 大鼠体内药动学研究

3．2 小鼠体内组织分布研究

4 讨论

4．1 给药剂量和给药途径的选择

4．2 药动学相关参数意义

4．3 观察组织中FM分布方法的选择

5 小结

第四章 自制FMSSD与市售胶囊的生物等效性研究

1 仪器与材料

1．1 仪器

1．2 试剂

1．3 动物

2 实验方法

2．1 色谱条件

2．2 大鼠体内生物等效性研究

2．3 数据的处理

3 实验结果

3．1 给药后FM的经时血药浓度

3．2 给药后的药动学参数计算结果

3．3 生物等效性评价

3．3 双单侧t检验及(1-2α)％置信区间

4 讨论

5 小结

第五章 FMSSD的药效学研究

1 仪器与材料

1．1 仪器

1．2 试剂

1．3 动物

2 实验方法

2．1 小鼠热板镇痛实验

2．2 小鼠醋酸扭体实验

2．3 数据处理

3 实验结果

3．1 小鼠给药后对热板法实验的影响

3．2 小鼠给药后对醋酸扭体实验的影响

4 小结与讨论

全文总结

参考文献

致谢

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