论文说明
摘要
总体研究方案和创新点
符号说明
前言
第一章Cas9 mRNA和sgRNA的准备
1．实验材料
1．1主要实验器材
1．2主要试剂药品
1．3常用试剂的配制
2．实验方法
2．1兔LDLR和ApoE基因的检索
2．2兔LDLR和ApoE基因修饰位点的筛选和sgRNA的设计
2．3 CRISPR／Cas9二合一质粒构建及鉴定
2．4体外转录为mRNA
3．实验结果
3．1 LDLR和ApoE基因修饰位点的设计
3．2 sgRNA的寡核苷酸链引物的设计
3．3 CRISPR／Cas9二合一质粒构建及鉴定
总结和计划
第二章利用多sgRNA靶向敲除兔LDLR和／或ApoE基因
1．实验材料
1．1主要实验器材
1．2主要试剂药品
1．3实验动物
1．4常用试剂的配制
2．实验方法
2．1供受体的准备
2．2收集供体兔的受精卯
2．3 sgRNAs和Cas9mRNA显微注射至受精卯
2．4胚胎移植
2．5胚胎移植后受体兔孕期与分娩护理
2．6原代兔的基因鉴定
2．7脱靶位点的预测与检测
2．8突变兔的表型检测
3．1原代兔PCR结果
3．2突变兔的基因型
3．3脱靶分析
3．4突变兔的血脂浓度检测
3．5突变兔的血浆载脂蛋白分析
3．6突变免的血浆脂蛋白类型分析
3．7动脉粥样硬化组织病理分析
小结和计划
第三章第7外显子突变的自发性高胆固醇血症LDLR-／-兔模型的制备
1．实验材料
2．实验方法
2．1 sgRNA和Cas9mRNA显微注射至受精卵
2．2蛋白结构预测
2．3突变兔血浆FPLC分析
2．4血浆炎性介质(IL-1β、IL-6、CCL2)的测定和血浆白细胞计数
2．5 Masson三色染色
3．1突变兔的基因型
3．2突变免的编码氨基酸
3．3蛋白结构模拟
3．4血脂检测
3．5血浆炎症因子检测
3．6血浆白细胞计数
3．7血浆载脂蛋白和脂蛋白的分析
3．8动脉粥样硬化分析
小结
第四章ApoE-／-兔模型的制备
1．实验材料
2．实验方法
3．实验结果
3．1突变兔基因型
3．2蛋白结构分析
3．3血浆ApoE蛋白检测
3．4血脂含量检测
3．5子代兔的检测
小结
全文讨论
全文总结
综述
参考文献
攻读学位期间发表论文及科研情况
致谢
声明
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