油茶枯饼中皂甙的提取纯化及分析新方法研究

摘要

茶皂素是一类齐墩果烷型三萜类皂甙，是一种性能优良的天然非离子型表面活性剂，具有抗菌消炎、杀灭病毒、抗氧化、抗高血压、抑制酒精吸收保护肠胃以及杀虫驱虫等功能，因此，开发利用这一资源有着重要意义。本论文以油茶饼粕为原料，研究了油茶饼粕中茶皂素的提取、分离纯化工艺及茶皂素的定量分析新方法，并对油茶皂素的结构进行了初步研究。主要研究成果如下： 应用具有控压和控温的密闭微波萃取装置对油茶枯饼中茶皂素进行微波萃取研究，讨论了乙醇浓度、固液比、提取时间和提取温度对提取率的影响。通过正交实验，得出微波辅助提取茶皂素的最佳工艺条件为萃取剂乙醇-水（9:1, V:V）溶液、固液比1：20（W/V）、萃取时间9 min和萃取温度90 ℃。并与乙醇溶剂回流提取方法相比较，微波萃取不仅大大缩短提取时间，而且提高了茶皂素得率和纯度。 建立了毛细管电泳测定茶皂素含量的定量分析新方法，并用此方法考察测定了油茶枯饼和不同浓度乙醇水溶液洗脱大孔树脂流出组分中的茶皂素含量。采用毛细管胶束电动色谱法，考察了不同浓度乙醇水溶液洗脱大孔树脂对油茶皂甙的提纯效果，在高浓度的缓冲溶液中首次成功一次性分离出8种以上的油茶皂甙峰。 应用优化的高效液相色谱-质谱联用方法对茶皂素对照品进行分析，较好地分离出了28个茶皂素峰。在负离子检测模式下，由电喷雾质谱得到各成分的准分子离子峰，再根据二级多反应检测获得进一步的结构信息，大致推测出其中18种主要成分的可能结构。 采用分子印迹技术制备了槲皮素分子印迹聚合物，并通过装入固相萃取柱试验了聚合物对槲皮素的选择性能，研究了槲皮素在柱上的保留行为。结果表明槲皮素印迹聚合物对槲皮素有特异选择性吸附，实现了实际样品金银花中槲皮素的分离与富集。该印迹聚合物可望用于油茶枯饼中茶皂素的纯化工艺。