胡萝卜（Daucus carota.L.）细胞外周糖蛋白结构及翻译后修饰的研究

摘要

用层析法和层析等电点聚集法,从胡萝卜细胞悬浮培养液中提取和纯化了目的蛋白EDGP.测定结果表明,EDGP前20个氨基酸残基为信号肽序列,它在EDGP的成熟过程中被切除;成熟EDGP的N-未端被焦谷酰胺磷酸化修饰;EDGP的氨基酸序列中有11个潜在的磷酸化位点,其中7个没有被磷酸化修饰;在EDGP胰蛋白酶的水角产物中,这些未被磷酸化的多肽是T1、T5、T11、T15、T19、T23和T25.通过用正碘乙酰-（5-硫基-1-奈基）乙二氨（1,5-I-AEDANS）对半胱氨酸的特异性荧光标记,并结合MALDI-TOF-MS对EDGP是否含有自由半胱氨酸进行了鉴定,结果表明：在EDGP中不含有自由半胱氨酸,即在EDGP序列中的12个半胱氨酸,形成分子内二硫键.通过比较存在或缺少还原剂条件下的肽谱差异,并依据MALDI-TOF-MS的分析结果,证实EDGP的半胱氨酸70与半胱氨酸158之间形成了二硫键.

目录

文摘

英文文摘

1.文献综述

1.1植物中的胰岛素受体类蛋白

1.1.1碱性7S球蛋白

1.1.2细胞外周糖蛋白(EDGP)

1.1.3其他的类胰岛素受体蛋白

1.2 EDGP类蛋白质的翻译后修饰

1.2.1蛋白水解切除

1.2.2糖基化与糖蛋白

1.2.3二硫键形成及其位点分析

1.2.4磷酸化及其鉴定

2.材料与方法

2.1材料

2.2方法

2.2.1胡萝卜细胞的悬浮培养

2.2.2 EDGP的纯化

2.2.3蛋白质浓度的测定

2.2.4糖蛋白的鉴定

2.2.5 EDGP纯度的鉴定

2.2.6 EDGP单体的鉴定

2.2.9配位体印迹分析

2.2.10纯化蛋白特性的质谱分析

2.2.11胶内酶切多肽的质谱法鉴定

2.2.12肽谱的质谱法分析

2.2.13 EDGP中自由半胱氨酸的鉴定

2.2.14二硫键位点的鉴定

3.结果与分析

3.1纯化蛋白样品EDGP的鉴定结果

3.2纯化蛋白样品EDGP糖蛋白鉴定结果

3.3 EDGP的纯化及组分分析结果

3.4未变性的EDGP准确分子量的测定结果

3.5 EDGP在细胞中的组织定位

3.6 EDGP与豆类胰岛素间的相互作用

3.7 EDGP N-端的翻译后修饰及磷酸化位点

3.7.1 N-末端翻译后修饰

3.7.2没有修饰的多肽

3.7.3潜在的磷酸化位点

3.7.4 EDGP空间结构的分析

4.讨论与小结

5.参考文献

攻读学位期间发表的论文

缩写词

致谢