三种形式肿瘤抗原负载的脐血树突状细胞体外诱导抗卵巢癌免疫反应

摘要

目的:制备人卵巢癌细胞系HO-8910细胞的冻融物、弱酸洗脱肽和总RNAN,用于负载脐血树突状细胞(dendritic cells DCs),观察负载肿瘤抗原的DCs体外激活异体混合T淋巴细胞效应和激活的细胞毒性T细胞(cytotoxic T lymphocyte CTL)对卵巢癌细胞的杀伤效应.寻找最佳的脐血树突状细胞负载抗原方式,激发高效的抗卵巢癌免疫反应,为进一步的动物实验和临床试验奠定基础,从而为卵巢癌的生物治疗提供新的思路.材料和方法:采集健康足月妊娠孕妇的脐带血,以淋巴细胞分离液分离脐血单个核细胞(cord blood mononuclear cell CBMNC),将其中贴壁细胞在细胞因子rhGM-CSF2000u/ml、rhIL-4 500u/ml及rhTNF-α100u/ml的配伍作用下诱导分化为DCs.反复冻融法制备人卵巢癌细胞系HO-8910肿瘤细胞的冻融物,PH为3.3的枸橼酸-磷酸盐缓冲液洗脱肿瘤细胞表面与MHC-I类分子结合的抗原肽以及超绝UNIQ-10柱总RNA抽提试剂盒抽提肿瘤细胞总RNA,用其作为卵巢癌抗原负载DCs.<'3>H-TdR掺入法测定三种形式肿瘤抗原负载的DCs对异体外周血混合T淋巴细胞的体外活化效应.MTT法检测活化的CTL对人卵巢癌细胞系HO-8910肿瘤细胞的杀伤作用.结论:CBMNC可以在GM-CSF、IL-4和TNF-α的作用下体外诱导分化为功能性DCs.反复冻融法,PH为3.3的枸橼酸-磷酸盐缓冲液洗脱法以及超绝UNIQ-10柱总RNA抽提试剂盒可得到卵巢癌细胞的冻融物、弱酸洗脱肽和总RNA,用其负载脐血DCs,在体外均可激活CTL,有效地诱导特异性抗卵巢癌免疫反应.

目录

文摘

英文文摘

序 言

一、人卵巢癌细胞培养和抗原的制备

材料和方法

结 果

二、DC的体外培养、鉴定和抗原负载

材料和方法

结 果

三、DC活化淋巴细胞对肿瘤细胞的体外杀伤

材料和方法

结 果

讨论

结论

参考文献

综 述:树突状细胞与卵巢癌的免疫治疗

缩略词表

致 谢