粉防己碱合用还原型谷胱甘肽对帕金森病大鼠模型神经保护效应的实验研究

摘要

目的：建立帕金森病大鼠动物模型，观察粉防己碱合用谷胱甘肽对其生物学行为的影响。 方法：应用定向注射6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)法制作模型，术后4周以阿朴吗啡(apomorphine,APO)诱发的旋转实验检测模型成功率，并将成功模型随机分组，给予腹腔注射不同药物，分组如下：未治疗组(生理盐水10 mg·kg<'-1>·d<'-1>)，谷胱甘肽(Glutathione，GSH)治疗组(GSH300 mg·kg<'-1>·d<'-1>)，左旋多巴(levodopa，L-dopa)治疗组(L-dopa 25mg·kg<'-1>·d<'-1>)，GSH+L-dopa+粉防己碱(Tetrandrine，Tet)治疗组(GSH300 mg·kg<'-1>·d<'-1>，L-dopa．25mg·kg<'-1>·d<'-1>，Tet 15 mg·kg<'-1>·d<'-1>)，GSH+Tet治疗组(GSH300 mg·kg<'-1>·d<'-1>，Tet 15 mg·kg<'-1>·d<'-1>)，另加上正常对照组(生理盐水10nag·kg<'-1>·d<'-1>)，每组14只。给药50天后观察各组生物学行为的变化。 结果：术后4周阿朴吗啡诱发旋转实验的模型成功率为73.6％。给药50天后，未治疗组，GSH治疗组以及正常对照组的旋转次数和给药前相比没有明显变化，L-dopa治疗组，GSH+Tet治疗组，GGH+L-dopa+Tet治疗组的旋转次数比给药前明显减少，尤其是GSH+Tet治疗组，GSH+L-dopa+Tet治疗组注射阿朴吗啡后开始出现旋转的时间还出现了延后，并伴随旋转方向不恒定现象。GSH+L-dopa+Tet治疗组有的大鼠还有不转现象。 第二部分粉防己碱合用谷胱甘肽对帕金森病大鼠抗氧化作用的实验研究目的：观察粉防己碱合用谷胱甘肽对帕金森病大鼠脑组织抗氧化作用的影响。 方法：以上各组干预50天后每组随机取6只腹腔麻醉，然后迅速在冰浴中分离出患侧黑质和纹状体，制备匀浆，离心取上清液，用试剂盒检测黑质GSH、纹状体ROS、MDA含量。 结果：(1)GSH+Tet治疗组的ROS、MDA、MAO-B含量明显低于除正常对照组以外的其他各组，L-dopa，治疗组的ROS、MDA含量明显高于未治疗组。(2)GSH+Tet治疗组的GSH含量明显高于除正常对照组以外的其他各组。 第三部分粉防己碱合用谷胱甘肽对帕金森病大鼠酪氨酸羟化酶基因表达和多巴胺能神经元的影响目的：观察粉防己碱合用谷胱甘肽对帕金森病大鼠酪氨酸羟化酶基因表达和多巴胺能神经元数目的影响。 方法：(1)以上各组干预50天后每组取6只腹腔麻醉，然后迅速在冰浴中分离出患侧黑质，用RT-PCR方法测定各组大鼠黑质THmRNA表达的变化。(2)以上各组干预50天后每组随机取2只腹腔麻醉，经左心室灌注固定后断头取脑，行中脑冠状位冰冻切片，进行多巴胺能神经元酪氨酸羟化酶的免疫组化，观察阳性神经元的形态和数目。 结果：(1)GSH+Tet治疗组，GSH+L-dopa+Tet治疗组的大鼠黑质THmRNA表达水平明显高于除正常组以外的其他各组，而以GSH+Tet治疗组升高最明显。 (2)GSH+Tet治疗组，GSH+L-dopa+Tet治疗组，GSH治疗组的酪氨酸羟化酶阳性神经元都比未治疗组和L-dopa治疗组显著增加，而以GSH+Tet治疗组增加最明显。 第四部分粉防己碱合用谷胱甘肽对帕金森病大鼠脑兴奋性氨基酸的影响目的：观察粉防己碱合用谷胱甘肽对帕金森病大鼠纹状体谷氨酸、天冬氨酸水平的影响。 方法：：以上各组干预50天后每组取6只腹腔麻醉，然后迅速在冰浴中分离出患侧纹状体，生理盐水匀浆后加入1.5％高氯酸18000转/分离心10分钟，用高效液相色谱-荧光法检测各组谷氨酸、天冬氨酸的含量。结果：GSH 治疗组和未治疗组比较，天冬氨酸浓度明显降低(P<0.05)，谷氨酸有降低趋势，但没有显著性意义。GSH+Tet治疗组和GSH治疗组比较，谷氨酸浓度明显降低(P<0.05)，天冬氨酸有降低趋势，但没有显著性意义(P>0.05)。L-dopa治疗组的谷氨酸和天冬氨酸都比未治疗组显著增加(P<0.05)。 结论 1，采用SNC、VTA两点定向注射6-羟基多巴胺法制作单侧帕金森病大鼠模型方法可靠，成功率较高。GSH+L-dopa+Tet、GSH+Tet以及L-dopa三种干预治疗方法都可以改善PD大鼠的生物学行为，以GSH+L-dopa+Tet治疗组最明显。 2，GSH+Tet、GSH+L-dopa+Tet都能够显著增强PD大鼠的抗氧化能力，以前者更明显。 3，GSH+Tet、GSH+L-dopa+Tet 干预后PD大鼠THmRNA的表达明显增加。GSH+Tet、GSH+L-dopa+Tet、GSH三种干预治疗方法都可以减轻多巴胺能神经元的损害，以GSH+Tet治疗效果最显著。 4，GSH合用Tet要比单用GSH更能降低帕金森大鼠的谷氨酸水平，减轻兴奋性氨基酸的毒性作用。

目录

文摘

英文文摘

声明

前言

第一部分粉防己碱合用谷胱甘肽对帕金森病大鼠生物学行为影响的试验研究

第二部分粉防己碱合用谷胱甘肽对帕金森病大鼠抗氧化作用的实验研究

第三部分粉防己碱合用谷胱甘肽对帕金森病大鼠酪氨酸羟化酶基因表达和多巴胺能神经元的影响

第四部分粉防己碱合用谷胱甘肽对帕金森病大鼠脑兴奋性氨基酸的影响

结论

综述P-糖蛋白与血脑屏障

攻读学位期间公开发表的论文

致谢