毛葡萄叶水提物对大鼠脑缺血再灌注的保护作用

摘要

目的：通过建立大鼠大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion，MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型，探讨毛葡萄叶水提物对大鼠脑缺血再灌注的保护作用及其可能作用机制，为进一步研发毛葡萄的药物作用提供实验依据。 方法：(1)实验分组及给药：SD大鼠60只，♀♂各半，体重(250±20)g随机分为六组即：正常组，对照组，阳性药物尼莫地平组，毛葡萄大剂量组，毛葡萄中剂量组，毛葡萄小剂量组，每组大鼠10只。分组后第二天各组大鼠灌胃给药，毛葡萄大剂量组剂量(4g·kg-1·d-1)；毛葡萄中剂量组剂量(2g·kg-1·d-1)；毛葡萄小剂量组剂量(1g·kg-1·d-1)；尼莫地平组剂量(5mg·kg-1·d-1)，对照组和正常组大鼠灌等量生理盐水；各组每日灌胃给药1次。连续灌胃7天。 (2)大鼠脑缺血再灌注模型的制备：参照longa线栓法[1]建立大鼠大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion，MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型。除正常组之外，各组于末次给药后30min以用4％水合氯醛(1ml/100g)麻醉动物，手术分离并暴露右侧颈总动脉及颈内外动脉，结扎右侧颈总动脉近心端及颈外动脉，在颈总动脉近分叉处剪一小口，插入头端光滑尼龙线(直径0.23mm，18mm处作标记)，插人长度约18±0.5mm，结扎并固定线栓，缺血2h后拔掉线栓再灌注22h。再灌注22h后各组首先进行神经功能评分，然后麻醉大鼠腹主动脉取血4ml，取离心血浆分别用LDH、MDA、NO检测试剂盒检测血浆LDH、MDA、NO含量变化。 将取出的脑从额极至枕叶作等距切成A,B,C,D,E五个冠状脑片，每片厚度约为1.8mm，置于4％TTC液中37℃孵育染色30 min。染色后用4％多聚甲醛固定24h，用数码相机拍照后用AutoCAD软件进行统计脑缺血面积；用免疫细胞化学法检测脑bcl-2、caspase-3的表达。 结论： 1.毛葡萄叶水提物对脑缺血再灌注引起的脑损伤有明显的保护作用，具体表现在缺血面积的减小及神经功能的恢复。 2.毛葡萄叶水提物能明显降低脑缺血再灌注大鼠血浆MDA、LDH、NO水平；并可上调缺血周边区bcl-2的表达和下调caspase-3的表达；这些物质的变化可能与毛葡萄对脑缺血再灌注损伤的保护机制有关。 3.本文实验结果表明毛葡萄叶水提物对脑缺血再灌注损伤的保护作用明显好于尼莫地平，提示：毛葡萄具有较好的开发前景和实用价值。

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综述：脑缺血再灌注损伤机制的研究进展

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