熊果酸对乳腺癌SK-BR-3细胞增殖、凋亡的影响及其机制研究

摘要

目的：研究熊果酸(UrsolicAcid，UA)对人乳腺癌SK-BR-3细胞增殖和凋亡的影响，结合人体乳腺癌组织凋亡相关蛋白表达检测，探讨其作用机制，为UA的临床应用提供实验依据。 方法：采用四氮唑蓝(methylthiazolyltetrazolium，MTT)比色法观察UA对SK-BR-3细胞增殖的影响；光镜、Hoechst33258荧光染色及电子显微镜观察经UA处理后SK-BR-3细胞的形态变化；DNA琼脂糖凝胶电泳观察UA作用后SK-BR-3细胞凋亡的生化特征；流式细胞仪检测UA对SK-BR-3细胞周期和凋亡率的影响。应用用免疫组织化学技术检测ER(-)、HER2(+)的人体乳腺癌组织中凋亡相关蛋白COX-2、Bax、Bcl-2蛋白的表达情况。RT-PCR技术进一步检测UA作用下SK-BR-3细胞中COX-2、Bax、Bcl-2mRNA的表达变化。 结果：UA对SK-BR-3细胞的增殖具有显著抑制作用(P<0.05)，并呈时间和剂量依赖趋势，UA作用于SK-BR-3细胞24h、48h、72h的IC50(50％inhibitoryconcentration，半数抑制浓度)分别为〉60μmol/l、31.54μmol/l、24.16μmol/l；经UA处理后的SK-BR-3细胞可呈现典型的细胞凋亡形态学改变：胞核皱缩，染色质浓集；DNA琼脂糖凝胶电泳显示凋亡特征性梯状条带；流式细胞仪检测结果显示10-30μmol/L的UA作用48h使SK-BR-3细胞阻滞在G0/G1期(P<0.05)；UA作用48h后能使乳腺癌SK-BR-3细胞中COX-2、Bcl-2mRNA表达明显减少(P<0.05)，使Bcl-2/Bax比值减小(P<0.05)，而对BaxmRNA的表达未见明显影响；COX-2、Bcl-2、Bax蛋白在ER(-)，HER2(+)的乳腺癌组织中的表达阳性率分别为86.67％(26/30)，63.33％(19/30)，56.67％(17/30)，COX-2与Bax表达呈明显负相关(r=-0.37864，P<0.05)，与Bcl-2未见明显相关性。 结论：UA可抑制SK-BR-3细胞增殖和诱导细胞凋亡，并呈时间和剂量依赖趋势；该作用可能与UA抑制COX-2、Bcl-2mRNA表达，使Bcl-2/Bax减小以及阻滞细胞周期有关；ER(-)，HER2(+)的人乳腺癌组织中COX-2中阳性表达率较高，COX-2与Bax表达呈明显负相关，与Bcl-2表达未见明显相关性。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略词表

声明

引 言

第一部分熊果酸诱导SK-BR-3细胞凋亡

材料与方法

结 果

小 结

第二部分乳腺癌组织中凋亡相关蛋白的表达

材料与方法

结 果

小 结

讨论

结论

参考文献

综 述 肿瘤对TRAIL的耐受机制及增敏实验研究的进展

攻读硕士学位期间公开发表论文

致 谢