转染GFP人羊膜上皮细胞侧脑室移植治疗偏侧帕金森病大鼠模型的实验研究

摘要

目的： (1)观察人羊膜上皮细胞正常大鼠侧脑室移植后的存活情况； (2)观察人羊膜上皮细胞帕金森病(PD)大鼠模型侧脑室移植后的存活及分化情况，以及它对阿朴吗啡引起的PD大鼠旋转行为、黑质区多巴胺能神经元、纹状体区单胺类神经递质的影响。 方法： (1)细胞移植两周后免疫组织化学法检测人羊膜上皮细胞Oct-4和Nanog的表达情况； (2)采用6-羟多巴立体定向纹状体内注射制作偏侧PD大鼠模型，将制模成功大鼠随机分成两组：人羊膜上皮细胞(HAECs)组、NS组，另取正常大鼠作正常对照组。HAECs组侧脑室注射转染绿色荧光蛋白(GFP)的人羊膜上皮细胞，NS组侧脑室注射NS，正常对照组不做任何处理。1周后腹腔注射阿朴吗啡观察HAECs组和NS组大鼠旋转行为的变化，连续观察10周；在细胞移植后的第1、4、7、10周分别记录HAECs组和NS组大鼠体重；HAECs组大鼠细胞移植5周后免疫荧光电镜观察人羊膜上皮细胞GFP的表达情况；10周后TH染色观察HAECs组、NS组和正常对照组大鼠黑质区TH阳性神经元的变化情况以及侧脑室内人羊膜上皮细胞的分化情况；高效液相色谱法(HPLC)测定HAECs组、NS组和正常对照组大鼠纹状体多巴胺(DA)及其代谢产物3，4-二羟基苯乙酸(DOPAC)、高香草酸(HVA)以及脑脊液中多巴胺的水平。 结果： (1)人羊膜上皮细胞正常大鼠侧脑室移植二周后表达Oct-4和Nanog； (2)从移植后第二周开始，HAECs组PD大鼠旋转圈数较NS组明显降低(均P<0.01)；细胞移植后的第1、4、7、10周HAECs组和NS组大鼠体重无明显差异(均P>0.05)；细胞移植后5周，可见侧脑室内人羊膜上皮细胞表达GFP； HAECs组黑质区TH阳性神经元数量较NS组升高(P<0.01)，HAECs组、NS组黑质区TH阳性神经元数比正常对照组低(P<0.01)； HAECs组大鼠纹状体区DA及其代谢产物DOPAC含量较NS组明显升高(P<0.05)，HVA也较NS组显著升高(P<0.01)，HAECs组脑脊液中DA含量较NS组显著升高(P<0.01)，HAECs组、NS组纹状体DA、DOPAC、HVA及脑脊液中DA含量比正常对照组低(P<0.05)。 结论： (1)人羊膜上皮细胞正常大鼠侧脑室移植二周后可以存活并保持干细胞性质； (2)人羊膜上皮细胞PD大鼠侧脑室移植可以改善PD大鼠的症状，其机制可能与人羊膜上皮细胞释放的神经营养因子减少了6-OHDA对黑质区DA能神经元的损害，存活了更多的DA能神经元，增多的DA能神经元增加了纹状体区多巴胺有关。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：中英文对照缩略词语表

声明

第一部分 人羊膜上皮细胞正常大鼠侧脑室移植后存活情况的实验研究

引 言

实验材料

实验方法

实验结果

讨论

结论

附图

参考文献

第二部分 转染GFP人羊膜上皮细胞侧脑室移植对偏侧帕金森病大鼠模型黑质多巴胺能神经元影响的实验研究

引 言

实验材料

实验方法

实验结果

讨论

结论

附 图

参考文献

综述

综述（一） 人羊膜上皮细胞移植在神经系统方面的应用

综述（二） 神经营养因子与帕金森病

攻读学位期间公开发表的论文

致谢