颅脑损伤早期脑微血管内皮细胞紧密连接的变化及其意义

摘要

颅脑损伤是当今发达及发展中国家年轻人死亡和致残的主要原因，已成为影响全世界健康和社会经济的主要危害之一。颅脑损伤分为原发性损伤和继发性损伤。继发性脑损伤发生于伤后数小时至数天，脑水肿是常见的继发性脑损伤之一，常造成颅内压增高和脑血流灌注减少，加重脑组织缺氧缺血，从而形成恶性循环，最终造成脑组织不可逆的损坏，是颅脑损伤患者致死和致残的主要原因。近年来的研究发现，颅脑损伤后脑微血管内皮细胞紧密连接在脑水肿的发生发展过程中起重要作用，同时，减低颅脑外伤患者的死亡率和致残率的关键在于创伤早期正确的的临床干预已成为共识。众多研究显示rhEPO能保护脑微血管内皮细胞，减低BBB通透性，但关于其保护机制尚不清楚。rhEPO是否通过保护TJ而减低BBB通透性则鲜有文献报道。
　　 第一部分大鼠颅脑损伤早期脑微血管内皮细胞紧密连接的变化及其意义
　　 目的：通过观察大鼠颅脑损伤早期脑微血管内皮细胞紧密连接的动态变化，探讨颅脑损伤早期血脑屏障的改变在继发性脑损伤发生发展中的作用及其可能机制。
　　 方法：成年健康SD大鼠72只，完全随机分为假手术（9只）和打击组（63只)。打击组参照并改良Mamourou法制作大鼠闭合性颅脑损伤模型，假手术组只切开皮肤，不作打击。分别于致伤后1小时、3小时、6小时、12小时、24小时、3天、7天从两组中随机取大鼠9只，其中3只用于通过伊文氏蓝(EB)染色和分光光度仪测定脑组织EB含量检测BBB完整性；3只采用免疫组化方法，观察TJ蛋白免疫染色阳性血管；3只采用透射电镜观察微血管超微结构和实时荧光定量PCR检测紧密连接蛋白(闭合蛋白(Claudin-5)、咬合蛋白(Occludin)和闭锁小带蛋白(ZO-1))mRNA的表达。
　　 结果：打击组伤后3小时脑组织EB含量开始增加，至伤后3天达高峰，随后逐渐下降，7天后接近正常；伤后3小时，电镜下可见脑微血管内皮细胞间隙增大，紧密连接密度减低，开放增加，至伤后3天达高峰，7天后接近正常；3h～3d的免疫阳性染色血管逐渐减少，染色程度变浅，闭合蛋白(Claudin-5)、咬合蛋白(Occludin)和闭锁小带蛋白(ZO-1)mRNA的表达显著低于假手术组，差异有统计学意义（P<0.05）。
　　 结论：颅脑损伤早期，脑微血管内皮细胞紧密连接相关蛋白的变化，可引起BBB通透性的改变，是血管源性脑水肿发生发展和中枢神经系统内环境紊乱的主要病理基础；紧密连接及其相关蛋白在颅脑损伤早期表达变化的规律符合临床脑水肿发展趋势；着眼于脑微血管内皮细胞紧密连接的相关治疗，有可能维持BBB的正常通透性，阻止血管源性脑水肿的发生发展，减少或减轻继发性脑损伤，达到改善预后的目的。
　　 第二部分rhEPO对大鼠颅脑损伤早期脑微血管内皮细胞紧密连接的保护作用
　　 目的：通过观察大鼠颅脑损伤后早期应用rhEPO对脑微血管内皮细胞紧密连接及其相关蛋白的影响，探讨rhEPO对颅脑损伤早期脑微血管内皮细胞的保护作用及其机制。
　　 方法：成年健康SD大鼠126只，随机分为打击组和打击+rhEPO组，每组63只，两组均参照改良Mamourou法制作大鼠闭合性颅脑损伤模型。打击+rhEPO组伤在打击后即刻经腹腔注射rhEPO注射液(3000IU/kg)，以后每24小时腹腔注射一次直至被处死，打击组注射等量生理盐水。分别于致伤后1小时、3小时、6小时、12小时、24小时、3天、7天从两组中随机取大鼠9只，其中3只用于伊文氏蓝(EB)染色和分光光度仪检测脑组织EB含量；3只采用免疫组化方法，观察TJ蛋白免疫染色阳性血管；3只采用实时荧光定量PCR检测紧密连接蛋白(闭合蛋白(Claudin-5)、咬合蛋白(Oecludin)和闭锁小带蛋白(ZO-O))mRNA的表达。
　　 结果：伤后3h～3d，打击+rhEPO组脑组织EB含量显著低于同时间点打击组，差异有统计学意义(P<0.05)；免疫阳性染色血管增多，染色程度变深，闭合蛋白(Claudin-5)、咬合蛋白(Occludin)和闭锁小带蛋白(ZO-1)mRNA的表达显著高于同时．间点打击组，差异有统计学意义(P<0.05)。
　　 结论：颅脑损伤早期应用rhEPO可保护脑微血管内皮细胞，明显增加脑微血管内皮细胞紧密连接蛋白的表达，降低内皮细胞通透性，减轻脑水肿，有望成为临床治疗颅脑损伤的新型药物。

目录

文摘

英文文摘

引言

第一部分 大鼠颅脑损伤早期脑微血管内皮细胞紧密连接的变接及意义

1． 实验材料

2． 实验方法

3． 结果

4． 讨论

参考文献

第二部分 rhEPO对大鼠颅脑损伤早期脑微血管内皮细胞紧密连接的保护作用

1． 实验材料

2． 实验方法

3． 结果

4． 讨论

参考文献

研究小结

综述 脑微血管内细胞紧密连接的相关研究

参考文献

攻读学位期间发表的论文

中英文缩略词表

致谢