益生菌对坏死性小肠结肠炎新生鼠模型肠损伤的保护

摘要

目的:
　　建立新生SD大鼠坏死性小肠结肠炎(neonatal necrotizing enterrocolitis, NEC)模型,研究补充益生菌双歧杆菌对NEC新生大鼠肠组织中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha, TNF-α)、白介素10(Interleukin-10, IL-10)和诱导型一氧化氮合酶(inducible isoform nitric oxide synthase, iNOS)的影响,探讨双歧杆菌对新生儿坏死性小肠结肠炎的保护作用。
　　方法:
　　128只出生2天的SD(Sprague-Dewley)大鼠,雌雄不限,被随机分成4组,每组32只。A组建立NEC模型:生理盐水0.2ml/只灌胃每天一次,持续一周,一周后,予腹腔注射LPS(5mg/kg,用生理盐水配成5mg/ml)建立NEC模型。B组建立NEC模型并添加双歧杆菌:每只每日0.04g(含2亿个活菌)双歧杆菌灌胃(用PH=7.4的生理盐水配制0.2ml/只),持续一周,同A组腹腔注射内毒素(lipopolysaccharide, LPS)建立NEC模型。C组为空白对照组:仅用生理盐水0.2ml/只灌胃,每天一次,持续一周。D组为双歧杆菌对照组:仅添加双歧杆菌,方法同B组。A组和B组腹腔注射LPS后,于2、6、12、24小时,每个时间点随机抽取8只采用颈椎脱臼法快速处死,C组和D组于相同时间点随机抽取8只处死,解剖回盲部近端肠管观察其病理标本,应用iNOS免疫组织化学染色,进行定性、定位及定量统计分析;并留取十二指肠下端至直肠上端肠道组织,采用ELISA法(酶联免疫吸附实验)检测肠组织匀浆中TNF-α、IL-10含量。
　　结果:
　　1.各组新生SD大鼠大体形态学及肠组织病理学改变A组注射LPS造模后,迅速出现懒动拒乳、腹胀腹泻;6~12小时症状加重,表现为活动度更差,精神萎靡,呼吸增快,严重者出现抽搐,甚至死亡。动物处死后,解剖所见胃潴留明显,部分肠管可见暗红色坏死点,甚至表现为晦暗无光泽,肠壁水肿僵硬,脆性增加,以6小时明显;B组造模及双歧杆菌灌胃处理后,也相继出现腹胀、活动度减少,但程度相对较轻,恢复较快,解剖后肠管大体情况相对较轻。A组造模后,光镜下6小时左右可见粘膜下层或固有层严重分离,肠绒毛腺体崩解分离、脱落缺失;12小时部分肠绒毛上皮细胞开始修复,但轮廓不清;24小时后粘膜下层和肌层水肿有所消退,肠绒毛结构明显。B组病理组织学改变较A组轻微。B组2小时、6小时、12小时、24小时肠组织病理损伤评分分别是(1.127±0.344)、(2.067±0.579)、(1.279±0.460)、(1.125±0.453),均显著低于A组(P＜0.05)。
　　2.各组新生SD大鼠肠组织TNF-α、IL-10及iNOS变化B组2小时、6小时、12小时肠组织TNF-α分别是(244.464±11.264)、(250.674±11.139)、(246.233±11.750)ng/ml,均显著低于A组(P＜0.05);B组各时间点肠组织IL-10分别是(186.325±10.448)、(189.758±9.346)、(186.476±9.930)、(199.793±9.987)ng/ml,均显著高于A组(P＜0.05);B组各时间点肠组织iNOS灰度值别是(94.476±11.042)、(116.556±11.898)、(99.339±15.680)、(92.094±10.682),均显著低于A组(P＜0.05)。统计表明:肠组织病理损伤评分与TNF-α和iNOS水平成正相关性(r值分别是0.646和0.774),肠组织病理损伤评分与IL-10水平成负相关性(r值为-0.598)。
　　结论:
　　1.给予双歧杆菌灌胃后的新生大鼠NEC实验组,肠组织TNF-α和iNOS水平有显著下降,表明双歧杆菌或许通过抑制炎症级联反应中TNF-α和iNOS来保护肠道。
　　2.给予双歧杆菌灌胃后的新生大鼠NEC实验组,肠组织IL-10水平显著升高,表明双歧杆菌或许通过增加肠道免疫性IL-10的表达来保护肠道。
　　3.肠组织病理损伤评分与TNF-α和iNOS水平成正相关性(r值分别是0.646和0.774);肠组织病理损伤评分与IL-10水平成负相关性(r值为-0.598),TNF-α、iNOS和IL-10可能共同参与了NEC的炎症病理过程。
　　4.双歧杆菌对新生鼠坏死性小肠结肠炎肠损伤有明显保护作用。

目录

中文摘要

Abstract

引言

材料与方法

1. 材料与设备

2. 实验方法

3. 肠损伤形态学观察

4. 检测肠组织中 TNF-α、IL-10 的含量(ELISA 方法)

5. 检测肠组织中 iNOS(免疫组化方法)

6. 统计学处理

结果

1. 外观情况及大体标本改变

2. 组织病理学改变

3. 肠组织损伤评分变化

4. 肠组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量变化

5. 肠组织白介素 10(IL-10)含量变化

6. 肠组织诱导型—氧化氮合酶(iNOS)改变

7. 肠组织评分与 TNF-α、IL-10 含量及 iNOS 灰度值相关性分析

附图

讨论

结论

参考文献

综述

参考文献

英文缩略词表

攻读学位期间公开发表的论文

致谢